易基因｜RNA m7G甲基化测序（m7G-MeRIP-seq）

2024-06-08 15:02:49

N7-甲基鸟苷（N7-methylguanosine，m7G）是真核生物tRNA、rRNA和mRNA 5'cap中最丰富的修饰之一。作为一种重要的表观遗传修饰，m7G RNA甲基化在基因表达、加工代谢、蛋白质合成、转录稳定等方面发挥着重要的作用，参与疾病发生发展等多种生命过程。

对于m7G RNA甲基化修饰的检测，易基因采用基于抗体富集的m7G-MeRIP-seq，利用m7G特异性抗体富集发生m7G甲基化修饰的RNA片段（包括mRNA、lncRNA等rRNA去除所有RNA），结合高通量测序，对RNA上的m7G修饰进行定位与定量，总RNA起始量可降低至10μg，最低仅需1μg总RNA。

技术优势：

起始量低：样本起始量可降低至10-20μg，最低仅需1μg总RNA；

高通量测序：全转录组m7G位点高通量测序，可同时检测mRNA和lncRNA；

样本要求：可用于动物、植物、细胞及组织的m7G检测；

重复性高：m7G-MeRIP-seq的IP富集重复性高，最大化降低抗体富集偏差；

应用范围广：广泛应用于组织发育、干细胞自我更新和分化、热休克或DNA损伤应答、癌症的发生与发展、药物应答等研究领域。

技术路线：

送样要求：

典型案例

哺乳动物转录组范围mRNA内m7G RNA甲基化图谱

Transcriptome-wide Mapping of Internal N7-methylguanosine Methylome in Mammalian Messenger RNA

背景

m7G RNA甲基化在真核mRNA中的存在和分布有待研究。

方法

本研究开发了基于抗体富集m7G RNA甲基化修饰测序方法：基于抗体富集的m7G-MeRIP-seq。

结果

本研究作者使用m7G-MeRIP-seq对RNA内m7G甲基化进行转录组范围的高通量测序分析，揭示了人和小鼠细胞内m7G甲基化水平（mRNA分布、富集的共有motif等）。另外，作者将METTL1基因鉴定为在mRNA内催化m7G修饰的一种甲基转移酶，表明RNA内m7G甲基化可影响mRNA翻译。

Zhang LS, et al. Transcriptome-wide Mapping of Internal N7-Methylguanosine Methylome in Mammalian mRNA. Mol Cell. 2019 Jun 20;74(6):1304-1316.e8.

图：m7G-MeRIP-seq绘制的人和小鼠细胞系内m7G位点的转录组范围分布图

参考文献：

Zhang LS, et al. Transcriptome-wide Mapping of Internal N7-Methylguanosine Methylome in Mammalian mRNA. Mol Cell. 2019 Jun 20;74(6):1304-1316.e8.

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