Worthington哺乳动物乳酸脱氢酶研究—

哺乳动物乳酸脱氢酶 (LDH) 作为五个四聚体同工酶存在，由两个不同亚基的组合组成。H亚基在心肌中占主导地位，适合丙酮酸的有氧氧化。M 亚基在骨骼肌中占主导地位，更关注无氧代谢和丙酮酸减少。

单位定义：一个单位在 25°C、pH 7.3 下每分钟氧化 1 微摩尔 NADH

请注意，哺乳动物乳酸脱氢酶的来源已从天然兔肌肉形式变为在大肠杆菌中表达的重组体。重组酶达到或超过先前提供的天然酶的规格。

艾美捷Worthington牛心LDH的特点：

分子量：35,000/亚基（Fosmire 和 Timasheff 1972）。136,700 ± 2,100/四聚体 (Huston et al . 1972)。

组成：Vallee 和 Williams (1975) 报道了它在低 pH 条件下的亚基解离。另见 Yang 和 Schwert (1972) 以及 Gold 和 Segal (1965)。

消光系数：消光系数=14.9。

活动：参见 Borgmann等人。（1974）。

特异性：该酶对 L(+)乳酸具有特异性。Meister (1950) 报告说它可以减少几种 α-酮酸和 α,β-二酮酸，但减少丙酮酸的速度大约是十分之一。

抑制剂：LDH 相当稳定。它被碘化物灭活。对汞苯甲酸盐的抑制作用很慢。见 Schwert 和 Winer (1963)；还有安德森等人。(1974) 和 Bloxham等人。（1975 年）。

活化剂：George等人报道了许多稳定酶的有机化合物，例如二甲亚砜、乙醇和甲醇。（1969 年）。己烯雌酚及其几种衍生物也可以稳定酶（Cohen et al . 1969）。

来自兔肌肉的 LDH 的特征：

分子量：140,000。

组成：Lovell 和 Winzor (1974) 报告说，四聚体在 pH 为 5 的醋酸盐 - 氯化物缓冲液中完全解离成两个二聚体（分子量 70,000）（对牛心 LDH 没有影响的条件）。磷酸盐和吡啶核苷酸稳定四聚体的四元结构。磷酸盐具有活化作用。另见 Cho 和 Swainsgood (1973)。

活性：Stambaugh 和 Post (1966) 以及 Zewe 和 Fromm (1965) 报告了反应动力学。

Worthington 乳酸脱氢酶的测定：

Method : 反应速度由 NADH 氧化导致的 340 nm 处吸光度降低来确定。在指定条件下，在 25°C 和 pH 7.3 条件下，一个单位每分钟会氧化 1 微摩尔 NADH。

试剂:

0.2 M Tris⋅HCl，pH 7.3

6.6 mM NADH 在高于 0.2 M Tris⋅HCl 缓冲液，pH 7.3

30 mM 丙酮酸钠在 0.2 以上 Tris⋅HCl 缓冲液中，pH 7.3

酶:

以 1 mg/ml 溶解在 0.2 M Tris⋅HCl 缓冲液中。使用前稀释酶以获得 0.02-0.04 ΔA/min 的速率。在 Tris 缓冲液中并保持低温。

Worthington哺乳动物乳酸脱氢酶蛋白质浓度的测定：

程序：

将分光光度计设置为 340 nm 和 25°C。

移液器如下：

Tris⋅HCl, 0.2 M pH 7.3 2.8 毫升

6.6 毫米 NADH 0.1 毫升

30 mM 丙酮酸钠 0.1 毫升

在分光光度计中孵育 4-5 分钟以达到温度平衡并建立空白率（如果有）。

加入 0.1 ml 适当稀释的酶，并从初始线性部分记录 ΔA 340 /min。

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