Worthington公司弹性蛋白酶研究：分子特征和应用

弹性蛋白酶，由动物的胰脏用水提取而得，也可用细菌的培养液在低温下用水提取而得。

弹性蛋白酶的用途：

在医学临床主要用于治疗高血脂症，防止动脉粥样硬化、脂肪肝。也可用于肉类和水产加工中的嫩化。

弹性蛋白酶的化学性质：

1.其外观呈淡黄色至深黄色粉末，也可是浅褐至深褐色液体。可溶于水，不溶于乙醇，有吸湿性。

2.纯胰弹性蛋白酶，由240个氨基酸残基组成的单一肽链，相对分子质量约为25000，等电点为9.5。

3.弹性蛋白酶可使结缔组织蛋白质中的弹性蛋白消化分解，包括肽键结合的、酰胺结合的和酯结合的进行加水分解。作用的最适pH值7.8，最适作用温度25℃。

4.弹性蛋白酶具有明显的β-脂蛋白酶作用，能活化磷酯酶A，降低血清胆固醇，改善血清脂质，降低血浆胆固醇及低密度脂蛋白、甘油三酯，升高高密度脂蛋白、阻止脂质向动脉壁沉积和增大动脉的弹性，具有抗动脉粥样硬化及抗脂肪肝作用。

5.弹性蛋白酶最初以酶原的形式存在，经过酶切后才有活性。

Worthington公司弹性蛋白酶特异性：

猪弹性蛋白酶 I 对 Ala-Ala 和 Ala-Gly 键具有特异性，而弹性蛋白酶 II 对 P1 位具有中等至大疏水性氨基酸的底物具有广泛的特异性（Gertler等人1977、Del Mar等人1980 和Gestin等人，1997）。猪弹性蛋白酶是最有效的弹性蛋白酶，其速率是人类白细胞弹性蛋白酶的 20 倍（Bieth 1978、Bieth 1986 和 Largman 1983）。

水解发生在几个步骤中。弹性蛋白酶与其底物之间形成吸附复合物，然后进行亲核攻击（S214）以形成酰基酶中间体，并释放个产物（底物的C末端）。中间体在脱酰基步骤中水解，再生活性酶并释放第二个产物 (Bieth 1986)。

Worthington公司弹性蛋白酶分子特征：

猪胰弹性蛋白酶由 240 个氨基酸的单肽链组成，并含有 4 个二硫键 (Sawyer et al . 1973)。它与来自其他物种的胰腺弹性蛋白酶具有高度的序列同一性，例如与其共享 86% 同一性的大鼠（MacDonald等人，1982）。弹性蛋白酶 I 和 II 基因具有序列相似性，尤其是在 5' 近端侧翼区域，包括 TATA 盒和推定的组织特异性增强子序列（Ornitz等人1985、Stevenson等人1986、Swift等人1984， Tani等人1987 和 Gestin等人1997）。

Worthington公司弹性蛋白酶的应用：

1.组织解离：因为弹性蛋白在结缔组织的弹性纤维中的浓度最高，所以经常使用弹性蛋白酶解离含有广泛细胞间纤维网络的组织。为此，它通常与其他酶一起使用，例如胶原酶、胰蛋白酶和胰凝乳蛋白酶。

2.膜蛋白溶解

3.蛋白质序列研究

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