ctab法提取dna流程图_(完整版)CTAB法提取DNA原理及步骤、制胶、电泳
CTAB
法提取
DNA
的原理及步骤：
冷冻的植物组织，在低温干燥状态下机械磨碎。通常精提
DNA
，
都要加液氮使材料变脆，易于研磨。低温降低了
DNase
的活性，利
用
CTAB
(十六烷基三甲基溴化铵)
去污剂溶解细胞膜，
使核蛋白等
解聚，使
DNA
游离出来。
CTAB
作为一种阳离子去污剂，可溶解细胞膜，与核酸形成
复合物，可使核酸沉淀出来。通过离心将
CTAB-
核酸复合物语糖类、
蛋白质等分离开来。
随后将复合物溶于高盐溶液中，
再加乙醇使核酸
沉淀，而
CTAB
溶于乙醇，从而去除
CTAB
。
1.
研磨
2.
加
1000ul
预处理液，
10-15min
，
4000r
，
10min,
弃上清(重复)
预处理液：
Tris-hcl (PH8.0)
提供缓冲环境，
防止核酸被破坏。
EDTA
(螯合二价阳离子)
0.5M
抑制
DNase
活性。
Nacl
5M
提供高盐环境，
使
DNA
充分溶解。
β
-
巯基乙醇
抗氧化剂，去除酚，糖，能与酚形
成
络合物，也可与糖结合
。
3.
加
800ul2×
CTBA(
预热)
，
10ul
β
-
巯基乙醇
，
65
℃
水浴
1-2h
。
15min
震
荡
4.
冷至室温，离心
1000r ,10min ,
取上清
750ul
，加
800ul
氯仿
-
异戊醇(
24:1
)
，
抽提
10min
，
1000r
，
15min,
重复
3
次。
氯仿：加速有机相与水相分层，去除核酸溶液中残余酚，抽提蛋白质等杂质。
5.
取上清，加
2
倍体积的无水乙醇，
-20
℃
,1h,
沉淀
DNA.
无水乙醇：
DNA
不溶于酒精，
CTAB
和一些蛋白质可以，
低温乙醇可抑制
DNase
活性，降低分子运动，易于
DNA
沉淀。
6.
4
℃
，
1000r,10min,
倒乙醇，收集
DNA.
7. 70
％乙醇洗涤
2
遍，风干(不可太干)
，溶于
40-60ul dd
水。
DNA
在凝胶中涌动时有电荷效应和分子筛效应，
DNA
分子在高于等
电点的
PH
溶液中带负电荷，
在电场中向正极移动。
由于相同数量的
双链
DNA
几乎具有等量的静电荷，
因此能以同样的速率向正极移动。
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