tunel凋亡试剂盒说明书_急求!!罗氏TUNEL试剂盒( In Situ Cell Death Detection Kit, TMR red )中文说明书或者操作步骤,急急急!!谢谢啦!...
因为没有做过实验,而且英文不咋地,我手上有英文说明书,大概知道;但是,具体步骤还是有点混乱,帮帮我这个初学者吧!我讲感激不尽!由衷的感谢您!
这是我翻译的,但是还是觉得不对,现在不知道怎么办了?请帮下我吧!
TUNEL凋亡检测:
Step 1:60℃烤片30min,二甲苯脱蜡,梯度乙醇水化,双蒸水。
Step 2:破膜剂中孵育8分钟0.1% Triton X–100, 0.1% sodium citrate,freshly prepared(或者• Place the slide(s) in a plastic jar containing 200 ml 0.1 M Citrate buffer, pH 6.0.• Apply 350 W microwave irradiation for 5 min.,若选择微波照射时,与下面微波照射作用有什么不同???)
Step 3:PBS冲洗3×5min
Step 4:侵入塑料瓶子200ml0.1MpH6.0柠檬酸盐缓冲液修复
Step 5:750W微波照射1分钟
Step 6:立即添加20-25℃双蒸水80ml冷却(自然冷却)
Step 7:PBS冲洗3×5min
Step 8:侵入0.1M Tris-HCl,pH 7.5 30分钟,(包含3% BSA牛血清白蛋白和20%牛血清)
Step 9:PBS冲洗3×5min遍,擦片
Step 10:滴加50ul配置好的TUNEL工作液。阴性对照组滴加50ul 2号液。阳性对照组在TUNEL前滴加DNase I recombinant.
Step 11:37℃湿盒中避光孵育1小时
Step 12:PBS冲洗3×5min
Step 13:50%甘油硫酸盐缓冲液封片,激光共聚焦显微镜下观察。
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