为了便于在普通高校和职业院校的实验教学领域，更高效地学习和使用紫外光谱仪，岛津为您制作了紫外教学实验方案，基于紫外光谱中最常用紫外定量方法进行设计，难度适当，实验成功率和重现性较高，对于负责实验教学和实验课程设计的老师很有帮助。

紫外光谱篇

紫外可见分光光度计测定水中石油烃含量

一、实验目的

1、掌握紫外可见分光光度计测定水中石油烃含量的方法

2、了解紫外可见光谱法定量分析的流程

二、实验原理

紫外可见分光光度法是利用物质的紫外可见吸收光谱进行定性和定量分析的方法。此方法属于分子光谱法，当分子吸收外来的辐射之后，外层电子从基态跃迁到激发态，产生了宽带的吸收光谱。物质的分子结构不同，吸收光谱就会有变化。

物质对光的吸收遵循朗伯比尔定律，即当入射光波长一定时，待测物质的吸光度A与浓度C和液层厚度l成正比。吸收的强度因波长而异，吸收光谱(对物质照射不同波长的单色光，测定吸收强度获取的吸收曲线)为该物质特有的性质。

根据这种原理对物质进行分析的方法称为吸光光度法，可进行①定性、②定量分析、③电子状态的分析。

A=εcl  (朗伯比尔定律)

ε为吸收系数，与溶液性质、温度和入射波长相关；l代表光程长度；C代表待测样品浓度。

定量分析方法是紫外可见分光光度法中最常见的方法之一。首先配置一系列不同浓度的标准样品，分别在最大吸收波长下测定其吸光度。将获取的吸光度作为纵轴，标准样品浓度作为横轴绘制标准曲线，然后利用标准曲线进行未知样品的测试，得到未知样品中目标物质的浓度。

本实验参考《HJ970-2018水质石油类的测定—紫外分光光度法》标准，使用分光光度计对水中石油类物质进行了含量测定。在PH≤2的条件下，用正己烷萃取样品中的石油类物质，于225nm波长处测定吸光度，依据朗伯比尔定律计算石油类物质的含量。

三、仪器与试剂

仪器：紫外可见分光光度计，2cm石英比色皿

试剂：无水硫酸钠，硫酸镁，石油类标准贮备液(ρ=1000mg/L)，待测样品为石油炼制厂废水和电镀厂废水。

样品配置：

1、标准溶液配制

吸取石油类标准使用液(ρ=100mg/L)，吸取10mL石油类标准贮备液(ρ=1000mg/L)于100ml容量瓶中，用正己烷定容，摇匀，配成石油类标准使用液(ρ=100mg/L)，现配现用。准确移取0.00mL、0.25mL、0.50mL、1.00mL、2.00mL和4.00mL石油类标准使用液于6个25mL容量瓶中，用正己烷稀释至标线，摇匀。标准系列浓度分别为0.00mg/L、1.00mg/L、2.00mg/L、4.00mg/L、8.00mg/L和16.00mg/L。

2、待测样品处理

萃取：将样品全部转移至1000mL分液漏斗中，量取25.0mL正己烷洗涤样品瓶后，全部转移至分液漏斗中，充分振摇2min，期间经常开启旋塞排气，静置分层后，将下层水相全部转移至1000mL量筒内，测量样品体积并记录。进行萃取后，参照标准曲线建立相同的步骤进行试样的测定。

脱水：将萃取转移液转移至已加入3g无水硫酸钠的锥形瓶中，盖紧瓶塞，静置。若无水硫酸钠全部结块，需补加无水硫酸钠至不再结块。

吸附：继续向萃取液中加入3g硫酸镁，置于水平振荡器上，振荡20min，静置沉淀。在玻璃漏斗底部垫上少量玻璃棉，过滤，待测。

四、实验步骤

1、仪器开机，确认紫外可见分光光度计初始化正常，并预热30分钟。

2、打开UV Probe软件，在菜单栏先点击光度测定，然后点击方法，打开参数设置界面，如下图所示。

在方法设置界面输入仪器主要测定参数(常用：多点/固定波长法)，包括：测试波长(225nm)、狭缝(根据仪器吸光度测试范围进行调节)等。

3、自动调零(扣空白)：参比及样品侧同时放置参比溶液，自动调零。

4、标准曲线测定：将样品侧比色皿置换成标准溶液序列依次进行测定。测定中注意需要先在标准表中输入样品ID及浓度值(如下图所示)，否则无法读取数据。以石油类浓度(mg/L)为横坐标，以吸光度为纵坐标，建立标准曲线。

5、样品测定：依次测定样品，同样需要在样品表中输入样品ID。

6、加标回收实验

在样品中分别添加浓度为10mg/L的标样，测试水中石油类含量并计算回收率。

五、数据及处理

1、测试得到的标准曲线如下图。拟合直线的相关系数为0.99972。

2、石油炼制厂废水和电镀厂废水中的石油类物质含量及回收率测试结果如下表所示。

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