NK 细胞基因编辑实例解读:Nucleofector 联用CRISPR/Cas9对 NK 细胞进行基因编辑
文献分享:基于CRISPR/Cas9改造人类自然杀伤细胞:转染敲除方案和解读方案用以评估其影响
CRISPR/Cas9-Based Gene Engineering of Human Natural Killer Cells: Protocols for Knockout and Readouts to Evaluate Their Efficacy
研究背景
自然杀伤细胞(natural killer cell,NK细胞)细胞在人体的先天免疫系统中起着重要的作用,能对各种病原体迅速反应,是抵御危险感染或异常细胞的第一道防线,是身体对抗癌症的正常储备。近年来人们才逐渐了解NK细胞在帮助抗击癌症和其它疾病方面的复杂性和治疗潜力。NK细胞疗法现已经成为一个炙手可热的领域。
目前,各大细胞治疗公司、研究机构、医院、高校等,正在如火如荼的开发基因修饰的NK细胞疗法产品,例如:CAR-NK细胞、具有修饰形式的CD16的NK细胞(例如Fate公司的FT516)、和敲除CD38的NK细胞,等等。
与此同时,研究人员也在测试各种增强NK细胞毒性和寿命的方法,以及在体内增强NK细胞治疗活性的辅助方法。
随着CRISPR/Cas9技术的不断进步,基因修饰NK细胞可能性和效率大大提高。推荐这本书的目标是把CRISPR/Cas9技术介绍到更广泛的NK细胞研究人员。该章节包括以下几部分内容:
NK细胞介绍和基因工程化淋巴细胞的历史
通过电转的方法递送CRISPR/Cas9诱导NK细胞双链断裂的实验方案,检测转染和编辑效率
数据分析和方法学优缺点讨论
今天给大家推荐的文献(Lambert et al. 2020)总结了大量的CRISPR/Cas9技术在NK细胞上的应用,概述了过去完成的方法、方案和结果,以及通过将Cas9 RNP引入细胞来进行特定基因组修饰的新方法,作者也详细介绍了通过使用4D-NucleofectorTM设备对原代人NK细胞进行转染的实验方案。
文章概述
This review outlines features of the cells in great detail (such as their function in physiological and pathological conditions) and also points out their potential utilization in treatment of cancer or tumor patients. However, to overcome some limitations e.g. long-term presence at tumor site in vivo it might be helpful to genetic engineer these cells by the help of the CRISPR/Cas9 technology.
This book chapter outlines an overview about methods, protocols and results done in the past and a new approach of specific genomic modification by introducing Cas9 RNPs into the cells. The authors hand over a precise protocol about the transfection of primary human NK cells by using the 4D-NucleofectorTM Device.
In their model, they genetically engineered the NK cells by knocking out the CXCR4 gene. The engineered cells showed reduced CXCR4 expression and thus reduced migration upon specific chemokine stimulation. All CRISPR materials (crRNA/tracrRNA, Cas9 protein) are used from IDT (Integrated DNA Technology) a company which referred on their website to start with the cell type–specific optimized protocol using the NucleofectorTM technology.
In this case, the optimized protocol for human NK cells is not yet available but they come up with the primary solution P3 and program CM-137 as their favorite conditions for 4D-NucleofectorTM Device. With this set up they tested the efficacy of the CRISPR/Cas9 genome editing tool in human NK cells and propose this protocol as a valuable approach for developing NK cells based therapies. Additionally, this technology enables to learn more about this fascinating cell type in research.
参考文献
Lambert M, Leijonhufvud C, Segerberg F, Melenhorst JJ, Carlsten M. CRISPR/Cas9-Based Gene Engineering of Human Natural Killer Cells: Protocols for Knockout and Readouts to Evaluate Their Efficacy. Methods Mol Biol. 2020; 2121:213–239
泽平科技作为lonza的在中国的忠实伙伴,在国内代理lonza各类产品服务已达十数年,已形成完善的lonza产品系售前售后、技术服务以及数个各类成熟的解决方案,服务于中国科研、企业等用户。搜索“北京泽平”可立即进入咨询报价!
Lonza Bioscience Solutions 为全球学术和产业研究机构的创新性研究提供研究和疾病发现工具,为生物制药和新兴技术提供解决方案,包括细胞基因治疗、抗体药、疫苗等领域的研发和生产,全程支持产品的商业化道路。
龙沙总部位于瑞士巴塞尔,1995年进入中国市场,目前在广州、苏州、南京、上海等地已设立生产基地与办事处。我们为众多的客户服务,从大型生物技术和制药公司,到学术机构及政府部门,为其提供临床前期、临床期到商业化阶段的先进生产服务。龙沙丰富的产品服务涵盖小分子活性药物成分(API)、生物药品、创新剂型、快速检测方案及细胞与基因疗法的相关技术等。
NK 细胞基因编辑实例解读:Nucleofector 联用CRISPR/Cas9对 NK 细胞进行基因编辑相关推荐
- 基因编辑新进展:利用CRISPR/Cas9和iPSC技术构建出首个急性髓系白血病进展模型
由西奈山伊坎医学院(Icahn Mount Sinai)领导的研究小组建立了第一个用于描述急性髓细胞白血病(AML)从早期到晚期的演变过程的细胞模型. 这一研究成果公布在2月的Cell Stem Ce ...
- 当基因编辑遇上艺术家,CRISPR是否还令人害怕?
说起 CRISPR 基因编辑技术,大家脑子里的第一个反应是什么?可以说不少人是既期待又害怕,但更多的可能是似懂非懂. 硅谷洞察再简单介绍一下 CRISPR 技术.CRISPR 是存在于细菌中的一种基因 ...
- 【生物】基因编辑研究方向全面盘点,一文带你了解基因魔剪的前世今生
2020年10 月 7 日,瑞典皇家科学院宣布,将诺贝尔化学奖授予法国埃马纽埃尔·卡彭蒂耶(Emmanuelle Charpentier)和美国詹妮弗·杜德纳(Jennifer A. Doudna)以 ...
- 植物基因编辑最新政策解读(2021年7月)
我国基因编辑技术的研发领先全球,但由于尚未出台基因编辑产品管理政策,相关产业面临技术研究领先.管理滞后.应用空白的局面.与会专家学者.企业代表纷纷结合国外基因编辑监管措施建言献策,呼吁基因编辑政策早日 ...
- 基因编辑技术 CRISPR/Cas9,“魔剪”一文通~
基因编辑, "何方神圣" 基因编辑是一种对靶基因或转录产物进行敲除.插入和定点突变等精确修饰的基因工程技术,主要通过人工核酸酶实现对基因组的特定基因序列的敲除.插入或精确修饰.目前 ...
- 中科院魏同镇教授解读韩春雨副教授基因编辑技术‘’NgAgo-gDNA‘’
韩春雨最新Nature Biotechnology文章详细解读 转自: 科学网-韩春雨最新Nature Biotechnology文章详细解读 - 魏同镇的博文 5月2日,Nature系列顶尖刊物_& ...
- 国际基因编辑科技发展报告
来源:全球技术地图 作者:贾晓峰 中国科学技术信息研究所 摘要:以特异性的改变遗传物质靶向基因序列为目标的基因编辑技术是近年生命科学领域最热门的研究领域之一.围绕基因编辑的相关领域研究和人物事件连续多 ...
- 预防“断种”风险,专家:基因编辑能提高我国种子竞争力
推荐阅读: 1.Cas9稳转细胞株,令CRISPR/Cas9基因编辑更高效 2.[2020年]CRISPR基因编辑技术最新进展盘点解读 据环球时报报道:种子被誉为农业的"芯片",但 ...
- 院士呼吁适度放开基因编辑
推荐阅读: 1.Cas9稳转细胞株,令CRISPR/Cas9基因编辑更高效 2.[2020年]CRISPR基因编辑技术最新进展盘点解读 随着中央"有序推进生物育种产业化"" ...
最新文章
- AI又被彩虹吹!​网易被预言为“下一个百度”?
- nagios配置监控的一些思路和工作流程
- jsp中include指令和动作的区别
- Swin Transformer对CNN的降维打击
- application.yml等yaml格式单独配置-横杠报错
- A Simple Problem with Integers POJ - 3468(线段树+区间查询+区间修改+建树+懒惰标记模板)+(树状数组)
- 都忘了自己还有一套房子了。。。
- 排序之选择排序:简单选择+堆排序
- java xml 默认名称空间 xpath_创意产业园办公空间设计
- mac苹果电脑如何查看mac地址
- VHDL实验三:一位全加器、四选一多路选择器
- caffee 安装教程
- 看Panasonic EZ0l21充电器有感
- 基于51单片机的对讲机原理图PCB程序设计
- 主析取范式与主合取范式
- 【数据库系统原理】第四章 高级数据库模型:统一建模语言UML、对象定义语言ODL
- 操作系统之短作业优先实现代码
- Ubuntu最全问题汇总(好东西分享了)
- 只看活动结案报告?营销活动效果你还能做的更好
- 西门子s7-1200plc通过 458modbus通讯控制5台变频器