JGG：中大骆观正组开发微量样品m(6)A测序新技术

2021年8月30日，Journal of Genetics and Genomics在线发表中山大学生命科学学院骆观正教授团队题为“Establishment of Transposase-assisted Low-input m⁶A Sequencing Technique”的研究论文。该论文提出一种用于鉴定微量样品m⁶A的高效便捷建库测序技术，鉴定到数千个高重复性m⁶A位点，为促进m⁶A功能研究提供方法学创新。

https://doi.org/10.1016/j.jgg.2021.08.007

N⁶-甲基腺嘌呤(N⁶-methyladenosine, m⁶A) 是真核生物mRNA中含量最丰富的碱基修饰类型，动态调控mRNA的剪接、定位、降解等多种代谢通路，进而参与细胞分化、肿瘤发生、免疫反应等重要生理过程。甲基化RNA免疫共沉淀高通量测序(MeRIP-Seq 或m⁶A-Seq) 是目前应用最广泛的m⁶A检测技术，但该技术通常需要大量起始RNA样品（>100μg总RNA），难以应用于微量样品的m⁶A检测，限制了其在临床稀缺样品和早期胚胎发育等场景中开展m⁶A研究。因此，该领域急需一种适用于低起始RNA量、简单快捷的m⁶A高通量测序技术。

该研究提出一种m⁶A高通量测序新技术：tMeRIP-Seq。该技术通过多聚胸腺嘧啶引物特异性地反转录含有PolyA尾的mRNA，利用Tn5转座酶切割RNA/DNA杂合链的特性，将mRNA/DNA杂合链片段化同时加上测序接头，极大地降低样品初始投入量并简化实验操作。基于这一策略，该研究以低至60ng总RNA为起始模板，鉴定到数千个可重复m⁶A位点，这些位点特异地富集于基因3′末端附近，并且有典型的RRACH基序。之后研究者应用该技术从一滴血中鉴定了m⁶A图谱，发现多个血液疾病相关基因可能受m⁶A调控。基于类似原理，tMeRIP-Seq技术未来还可能拓展到其它RNA修饰研究中。

tMeRIP-Seq技术原理图。通过Tn5预先加接头的RNA片段经过常规免疫共沉淀后，直接PCR即可获得测序文库。

中山大学生命科学学院博士后陈涛和博士研究生李言为该论文共同第一作者，骆观正教授为通讯作者。相关工作得到重点研发计划、国家自然科学基金、广东省自然科学基金和中国博士后科学基金等项目资助。

引用本文：Tao Chen, Yan Li, Dong-Zhao Ma, Zhang Zhang, Jian-Fei Xi, Guan-Zheng Luo. (2021). Establishment of Transposase-assisted Low-input m⁶A Sequencing Technique. Journal of Genetics and Genomics.

DOI:10.1016/j.jgg.2021.08.007.

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