BWA mem序列比对时出现:paired reads have different names 问题解决
问题:
在用BWA进行序列比对时出现:[mem_sam_pe] paired reads have different names: "A00920:973:H5GWJDSX3:2:1103:2582:12633:UMI_AAT_GTA", "A00920:973:H5GWJDSX3:2:1103:1624:12633:UMI_CGG_GTA"
原因分析:
查看两条reads所在的行信息:
在R1和R2中55841行中是不同的reads;在其他行中也出现这样的问题,如下:
查看R1和R2 fastq文件的总行数:
R1为26081112行,R2为26081516行,分析原因是在用python分别对Fastq文件进行序列单独处理时,导致R1和R2的序列出现了不对应的情况发生;
1)尝试采用fastq文件进行质控看能否解决,质控后R1和R2序列数一致了,但是reads不会进行重新排序,R1和R2 Paired Reads位置还是存在不一致情况,比对仍会出现问题;
序列数一致了;
比对仍然出错
相同行出现非paired reads情况,导致比对出错
问题解决:
方式1:采用bbmap进行fastq文件的修复;
软件安装:
conda install -c bioconda bbmap
fq文件修复
bash /path/repair.sh in=r1.fq in2=r2.fq out=r1.repair.fq out2=r2.repair.fq
修复之后序列数变少了:修复前26051120,修复后26020116
修复之后,采用BWA进行序列比对,一切正常!!!!
方式2:采用fastqtools进行序列重新排序(R1和R2的文件的序列数需保持一致,仅仅是pairedReads出现不对应的情况)
网址:GitHub - dcjones/fastq-tools: Small utilities for working with fastq sequence files.
wget https://github.com/dcjones/fastq-tools/archive/refs/heads/master.zipcd fastq-tools./autogen.sh./configure --prefix=/path/makemake install
软件在Bin文件夹下:
采用fastq-sort进行重新排序仍不能解决问题,方式1是最终解。
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