速率法和终点法的区别_生化反应曲线解析1(终点法)
在日常检验工作中,如果校准失败了、质控失控了、标本测值“你认为不准确”了,我们有很多途径去查找原因,其中查看反应曲线就是方法之一,而要想看懂和真正了解反应曲线,那么一定要了解生化检测所采用的分析方法。
目前,常用的分析方法主要分为两大类:终点法和速率法,其中终点法细分为一点终点法和两点终点法,速率法细分为速率法A和两点速率法,本期推送内容通过实例来讲解终点法(下期内容介绍速率法),进而认识反应曲线。
终点法定义:指经过一段时间(一般为几分钟)的反应,反应进行到完全,使全部底物(被测物)转变成产物,反应液的吸光度不再增加(或降低),吸光度的增加(或降低)程度与被测定物的浓度成正比,称为终点法,更确切地说应称平衡法,这是最理想的分析类型。
终点法实例1(一点终点法)
如TP(总蛋白)项目,样本与双缩尿试剂发生反应,样本中蛋白的肽键与铜离子形成蓝紫色螯合物,通过测定蓝紫色吸光度来求得样品中总蛋白的浓度。
如下图为日立7180全自动生化分析仪反应曲线,其中横坐标表示时间(以测光点表示,10min共记录34次吸光度),纵坐标为吸光度(蓝紫色吸光度),反应模式是先加入样品,再加入R1试剂,开始测光(约每18S记录一次吸光度),由于样本中的总蛋白和双缩尿试剂反应生成蓝紫色螯合物,吸光度上升,通过测定终点的吸光度(如反应曲线紫色区域显示)计算样本中总蛋白的浓度。
图为日立7180全自动生化分析仪图片
采用一点终点法项目(一般单试剂)如:
ALB、TP、CO2(单试剂)、GLU(单)等。
终点法实例2(两点终点法,一般双试剂)
如胆固醇项目,胆固醇试剂中的胆固醇氧化酶特异性分解底物胆固醇,产生过氧化氢,产生的过氧化氢在过氧化物酶的作用下与色原发生氧化反应,生成有色物质(该过程为传说中的Trinder反应),有色物质产生的吸光度大小与样本中胆固醇浓度成正比。
如下图:先加入样本,再加入R1试剂,37度温浴5min(该过程除内源性干扰,如抗坏血酸),取吸光度A1(如下图15和16点吸光度),加入R2试剂启动反应,胆固醇最终转化为有色物质,吸光度上升,取吸光度A2(如下图33和34点吸光度),通过A2-A1的吸光度差用于计算血清中胆固醇的浓度。
图为日立7180全自动生化分析仪图片
采用两点终点法项目(一般双试剂)如:
GLU、HbA1c、TC、TG、CRE、UA、HDL、LDL、比浊法项目(CYSC、B2MG、IgA、IgG等)等。
后续会推送
速率法反应曲线
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