ctab法提取dna流程图_CTAB法提取植物基因组DNA过程图示

CTAB法提取植物基因组DNA过程图示

主要试剂：

(1) 1M Tris-HCl (pH8.0)

(2) CTAB分离缓冲液

2% CTAB， 1.4mol/L NaCl， 20mmol/L EDTA， 100mmol/L Tris-HCl (pH8.0)，0.2%β-巯基乙醇，3% PVP共100ml：2g CTAB，8.18g NaCl， 0.74g EDTA.2Na.2H2O， 3g PVP，加入10ml 1mol/L的Tris-HCl(pH8.0)，加水定容到100ml。高压灭菌，室温保存(注：β-巯基乙醇不能进行高压灭菌，用时加入即可！)

(3)酚：氯仿：异戊醇(25：24：1)，氯仿：异戊醇(24：1)

(4)TE缓冲液 10mmol/L Tris-HCl (pH8.0)，1mmol/L EDTA

(5)3M NaAc 乙醇(75%，95%，100%)

(6)液氮

步骤：

(1)水浴锅升温至65℃，CTAB提取缓冲液置于水浴锅中预热，95%乙醇置于冰箱预冷，

(2)液氮研磨(研磨前研钵先用液氮预冷)注意戴手套，防冻伤！

(2)将粉末转移置2ml离心管中，加入800ul CTAB，充分混匀水浴1h，期间每隔5min，上下轻摇数次

(3)将离心管从水浴锅中取出，放置至室温，加等体积入酚：氯仿：异戊醇(25：24：1)｛酚贵，但效果更好！直接用氯仿：异戊醇(24：1)｝上下轻轻颠倒数次

(4)10000 rpm 4℃离心10min，取上清，用酚：氯仿：异戊醇(25：24：1)或氯仿：异戊醇(24：1)继续抽提至没有白色界面为止

(5)离心——取上清——抽提至无白色界面，小心吸取上清于另一1.5ml离心管中，加入2/3预冷的95%乙醇，NaAc使其终浓度为0.25mol/L，-20℃冰箱放置3小时或过夜。

(6)收集DNA

如果呈可见的丝状DNA，可用剪掉尖头的枪头吸取，转移至70%乙醇中进行洗涤

如果DNA呈现云雾状，可直接离心，小心地倒掉上清液，在松散的沉淀中加入70%乙醇中进行洗涤

(7)洗涤两遍，再用无水乙醇洗一遍，离心去上清，用灭菌的滤纸条将离心管口的乙醇吸干，倒置于超净工作台上自然风干

(8)风干至没有乙醇味，DNA周边发亮时，加入50ulTE缓冲液，-20℃冰箱保存

(9)0.8%琼脂糖凝胶电泳(图暂缺)

(10)紫外分光光度计测其DNA的纯度及含量

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