MycoLightTM 比率细菌膜电位试剂盒程序

MycoLightTM比率细菌膜电位试剂盒*红色/绿色荧光*产品，操作简单，快速，能帮助科研工作者更好的进行科学实验。

艾美捷 MycoLightTM 比率细菌膜电位试剂盒程序如下：

1.在任何合适的培养基中培养细菌。健康细菌的zui佳结果来自对数期培养。在PBS（成分C）或同等无菌缓冲液中，将细菌培养物稀释至每毫升约106个细胞。细菌可直接从培养基中稀释，无需清洗。准备足够的悬浮液，每次试验提供500 mL。

2.将等分的500µl细菌悬浮液放入流式细胞仪管中，用于进行每次染色实验。为去J化对照品和未染色对照品准备两个附加试管。

3.向去J化对照样品中添加10µl 500µM CCCP（成分B）并混合。

4.添加5µl霉菌染色剂™ 将绿色（100X）（成分A）注入每个流式细胞仪试管并混合（不要向未染色的对照样品添加染色剂）。在室温下培养样品30分钟。染色样品可在5分钟后进行分析，但信号强度持续增加，直到约30分钟。

5.染色细菌可在配备488 nm激光的流式细胞仪中进行分析。荧光在绿色（荧光素滤光片）和红色（德克萨斯州红色滤光片）通道中收集。前向散射、侧向散射和荧光应通过对数信号放大进行收集。

6.仪器调整对于检测相对较小的颗粒（如细菌）尤其重要。使用未染色的对照样品定位正向和侧向散射通道中的细菌种群。使用侧散射作为设置采集触发器的参数。

7.如上所述调整流式细胞仪后，应用去J化对照样品。使用正向散射和侧向散射对细菌进行选通，并调整荧光光电倍增管电压，使绿色和红色MFI值大致相等。不要设定补偿。

8.红色和绿色荧光强度的相对数量会随着细胞大小和聚集而变化，而红色和绿色荧光强度的比率可以用作膜电位的大小无关的指示器。数据还可以通过使用前向散射和侧向散射对细菌进行选通来处理，并使用红色和绿色荧光点图分析选通种群，报告MFI值为线性值，而不是通道。

9.在比率直方图上，在感兴趣的峰值周围设置标记，并记录平均比率值。对于红色和绿色荧光的点图，在感兴趣的群体周围设置区域，并记录每个群体的红色和绿色平均荧光强度（MFI）值。为了评估数据，将红色总体MFI除以绿色总体MFI。

10.在流式细胞仪中，细菌仅根据其大小和染色能力进行鉴定。zui好通过荧光显微镜检查每个样品，以确认检测到的颗粒确实是细菌。

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