肠道菌群检测粪便样本的采集保存方法
1 样本的采集
1.1 人粪便样本的采集
根据实验的目的,确定选择受试者的条件,如年龄、体重、糖尿病、身体健康状况、有无特殊疾病等因素。根据考虑的因素,选择符合条件的受试者。向受试者交代实验的目的、过程、风险、收益及退出机制等,确保受试者理解全部实验内容,待受试者签订知情同意书后开始取样。
让受试者将粪便排泄到干净的容器中,尽量避免尿液、马桶壁等对粪便样本的污染。粪便要采集新鲜的,建议采集排泄中后部的粪便,并尽量挖取中部内侧的粪便作为样本。用无菌勺对新鲜的粪便进行挖取,将粪便样本放入无菌保存管中,样本需 1g 左右。采集好的样本立刻放入-80℃冰箱进行低温保存。
1.2 小鼠粪便样本的采集
对于小鼠粪便样本的采集,建议采用拎尾法进行采集。小鼠排便后用灭菌的镊子夹取小鼠粪便,样本通常需 1g 左右,最少不低于 0.2g。样本采集后立刻放入-80℃冰箱进行低温保存,如果样本珍贵,需要进行备份。
1.3 大鼠粪便样本的采集
在取样当天换无菌垫料单独喂养大鼠,用灭菌的镊子夹取大鼠的粪便,当收集完一只大鼠的粪便后,用酒精擦拭镊子进行灭菌,继续收集另外一只大鼠的粪便。收集好的粪便放入无菌的 EP 管。每只大鼠粪便样本需 1g 左右。采集好的样 本需立刻放入-80℃冰箱进行保存。若采样时间较长,可以将采集好的样本放入冰盒(泡沫盒+干冰或冰袋)中进行存放,之后到实验室后再放入-80℃冰箱。
若无法实现低温保存,可以采用微基生物研发的粪便微生物 DNA 常温保存液,可以实现粪便微生物样本DNA检测的常温保存和运输。
2 样本的保存和寄送
将样本放入-80℃冰箱进行低温保存,若条件不允许,可短期(1 个月内)在-20℃冰箱中冷冻保存。注意在样本冻存期间,请勿反复冻融。 送样时请尽量使用冰盒(泡沫盒+干冰+冰袋),以保证运输过程中的低温条件(干冰的挥发消耗量约为 3 公斤/天)。在打包时先放入足量的干冰,之后用冰袋填充泡沫盒中间的空隙,为了保持冰盒中的低温环境,建议采用厚一点的泡沫盒。
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