ddPCR--数字微滴PCR
ddPCR–数字微滴PCR
ddPCR应用方向： 拷贝数变异研究、复杂来源样品中含量极低核酸分子的检测、NGS数据验证、NGS测序文库的鉴定、miRNA等差异微小的基因表达研究。
1.ddPCR的背景介绍
**ddPCR（dropletdigital PCR）：**在传统的PCR扩增前对样品进行微滴化处理，即将含有核酸分子的反应体系分成成千上万个纳升级别的微滴（其中，每个微滴含有的待检测靶分子为0个、1个或多个）。经过PCR扩增之后，逐个对每个微滴进行检测，有荧光信号的微滴判读为1，没有荧光信号的微滴判读为0，根据泊松分布原理及阳性微滴的个数与比例，即可得出靶分子的起始拷贝数或浓度。
目前有两种主流的实现形式：
- 油包水的ddPCR（用油把PCR反应液分隔成等体积的小液滴，再进行PCR反应）
- 芯片微孔的ddPCR（在芯片上预制了2万个小孔，把PCR反应液，物理地注入到芯片上的小孔中，密封后，进行PCR反应）
因为先写过10X genomics的文章（https://www.jianshu.com/p/566f51997a37），理解其单细胞测序是通过“油包水”结构将细胞逐个分离实现的。因此再来看ddPCR的时候，同样涉及到“油包水”结构，很容易让人误解为：它是通过将“目标基因序列”逐个分配到“油包水”微滴中实现的（事实上，ddPCR的技术还做不到一一分配的效果
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