? 基因工程是按照人们的意愿，进行严格的设计，并通过体外DNA重组和转基因等技术，赋予生物以新的遗传特性，从而创造出更符合人们需要的新的生物类型和生物产品。

? 限制酶能够识别双链DNA分子的某种特定脱氧核苷酸序列，并且使每一条链中特定部位的两个核苷酸之间的磷酸二酯键断开。

? 当限制酶在它识别序列的中轴线两侧将DNA的两条链分别切开时，产生的是黏性末端。

? 载体的要求：DNA分子上含有一个至多个限制酶切割位点，在细胞中能稳定存在并自我复制，对受体细胞无害，含有特殊的标记基因。基因工程中使用的载体除质粒外，还有λ噬菌体衍生物、动植物病毒等。

? 目的基因主要是指编码蛋白质的基因，也可以是一些具有调控作用的因子。

? 目的基因可以从自然界中已有的物种中分离出来，也可以用人工的方法合成（包括反转录法和化学方法人工合成：基因比较小、核苷酸序列又已知）。

? cDNA中不含有非编码区（启动子和终止子）、以及编码区中的内含子。

? PCR：高温变性（90-95）、低温复性（55-60）、中温延伸（70-75）、DNA双链复制原理

? 利用PCR扩增目的基因的前提是，要有一段已知目的基因的核苷酸序列，以便根据这一序列合成引物。

? 基因表达载体的作用：使目的基因在受体细胞内稳定存在，并且可以遗传给下一代，同时，使目的基因能够表达和发挥作用。
——>使目的基因能够在受体细胞内稳定存在并表达和发挥作用

? 标记基因的作用是为了鉴别受体细胞中是否含有目的基因，从而将含有目的基因的细胞筛选出来。
——>鉴别并筛选出含有目的基因的受体细胞

? 利用不同种限制酶切割载体和质粒，在连接后可以避免自身环化和反向连接。

? 使目的基因进入受体细胞内，并且在受体细胞内维持稳定并表达的过程，称为转化。

? 农杆菌能在自然条件下感染双子叶植物和裸子植物。

? 当植物体受到损伤时，伤口处的细胞会分泌大量的酚类化合物，吸引农杆菌移向这些细胞，这时农杆菌中的Ti质粒中的T-DNA可转移至受体细胞，并且整合到受体细胞染色体的DNA上。

? 原核生物具有一些其他生物没有的特点：繁殖快、多为单细胞、遗传物质相对较少等。

? 感受态细胞法：用一定浓度的钙离子溶液处理细胞，使细胞处于一种能吸收周围环境中DNA分子的生理状态，这种细胞称为感受态细胞。

? 在含有目的基因的DNA片段上用放射性同位素等作标记，以此作为探针。
——>用放射性同位素或荧光标记的含目的基因的DNA分子片段

? 抗虫或抗病的接种实验，观察生长发育状况

? 植物基因工程的应用：提高农作物的抗逆能力、改良农作物的品质、利用植物生产药物

? 动物基因工程的应用：提高动物生长速度（外源生长激素基因）、改善畜产品的品质、转基因动物生产药物、转基因动物作器官移植的供体

? 用基因工程的方法，使外源基因得到高效率表达的菌类细胞株系一般称为“工程菌”。

? 干扰素是动物或人体细胞受到病毒侵染后产生的一种糖蛋白。

? 体外完成转化后输入体内称为体外基因治疗，利用经过修饰的腺病毒直接向体内转移基因的方法称为体内基因治疗。目前都处于临床试验阶段。

? 基因工程在原则上只能生产自然界已经存在的蛋白质。

? 蛋白质工程的基本途径是：从预期的蛋白质功能出发、设计预期的蛋白质结构、推测相应的氨基酸序列、找到相对应的脱氧核苷酸序列（基因）

? 蛋白质工程是指以蛋白质分子的结构规律及其与生物功能的关系作为基础，通过基因修饰或基因合成，对现有蛋白质进行改造，或制造一种新的蛋白质，以满足人类的生产和生活需求。

? 蛋白质工程是一项难度很大的工程，目前科学家对大多数蛋白质的高级结构的了解还很不够。

? 细胞工程是指应用细胞生物学和分子生物学的原理和方法，通过细胞水平或细胞器水平上的操作，按照人的意愿来改变细胞内的遗传物质或获得细胞产品的一门综合科学技术。

? 愈伤组织是一类具有分生能力的薄壁细胞，具有排列疏松、高度液泡化、无定形态的特点。

? 区别杀菌和消毒所指的对象的不同。

? 选取胡萝卜含有形成层的部位（韧皮部）；接种的组织块要恒温避光

? 生长素>细胞分裂素，生根；生长素<细胞分裂素，发芽

? 在进行体细胞杂交之前，必须先利用纤维素酶和果胶酶去除这层细胞壁，获得有活力的原生质体。

? 人工诱导的方法：离心、振动、电击；用聚乙二醇（PEG）作诱导剂诱导细胞融合

? 细胞杂交（融合）的优点：克服不同生物远缘杂交不亲和的障碍。

? 作物脱毒：植物分生区附近（如茎尖）的病毒极少，甚至无病毒

? 在动物细胞培养前，用胰蛋白酶或胶原蛋白酶处理一段时间，这样组织快就会分散成单个细胞。

? 动物细胞培养的条件：1无菌、无毒的环境（抗生素、定期更换培养液）；2营养（促生长因子+血清血浆+合成培养基）；3温度和pH；4气体环境（5%CO2以维持培养液的pH）

? 通过显微操作去除卵母细胞中的核；将供体细胞注入去核的卵母细胞

? 选择MII期卵母细胞的原因：1体积大、易操作；2营养物质丰富；3细胞质中含有促进细胞核全能性表达的物质

? 生出与供体牛表型基本相同的犊牛的原因：1细胞质DNA表达的影响；2环境影响发生不可遗传变异

? 诱导动物细胞融合常用的诱导因素有聚乙二醇（PEG）、灭活的病毒、电击等。

? 从血清中分离抗体产量低、纯度低，而且制备的抗体特异性差。单克隆抗体最主要的优点在于它的特异性强、灵敏度高，可大量制备。

? 骨髓瘤细胞既能在体外大量增殖又能产生大量的特异性抗体。

? 从产生免疫小鼠的脾脏细胞中得到浆细胞；最后可以注射到小鼠的腹腔内增殖。