流式双染凋亡率的计算_Annexin V-FITC/PI双染法流式细胞术检测细胞凋亡

看到来我们眼科公共平台来使用Fortessa检测凋亡时，看到很多人都是泪流满面，鉴于此，作者大找网络资源结合自己的理解，针对普遍的问题给眼科的童鞋们一个交代，期待对大家有用，期待大家板砖！！

Reference

1. Galluzzi L, Aaronson SA, Abrams J, et al. Guidelines for the use and interpretation of assays for monitoring cell death in higher eukaryotes. Cell Death Differ2009; 16:1093-107.

一、原理在正常细胞中，磷脂酰丝氨酸(PS)只分布在细胞膜脂质双层的内侧，而在细胞凋亡早期，细胞膜中的磷脂酰丝氨酸(PS)由脂膜内侧翻向外侧。Annexin V是一种分子量为35~36kD的Ca2+依赖性磷脂结合蛋白，与磷脂酰丝氨酸有高度亲和力，故可通过细胞外侧暴露的磷脂酰丝氨酸与凋亡早期细胞的胞膜结合。因此Annexin V被作为检测细胞早期凋亡的灵敏指标之一。将Annexin V进行荧光素(FITC)标记，以标记了的Annexin V作为荧光探针，利用荧光显微镜或流式细胞仪可检测细胞早期凋亡的发生。

碘化丙啶(Propidium Iodide, PI)是一种核酸染料，它不能透过完整的细胞膜，但对凋亡中晚期的细胞和死细胞，PI能够透过细胞膜而使细胞核染红。

因此将Annexin V与PI(7-AAD也可以)匹配使用，就可以将处于不同凋亡时期的细胞区分开来。

二、注意事项

1． Annexin V-EGFP，Propidium Iodide (PI)避光保存及使用。

2． Propidium Iodide (PI)有毒，操作时要戴手套。

3．推荐使用悬浮培养细胞，如果是贴壁细胞，用胰酶消化不当，会引起假阳性，而用细胞刮子会造成细胞粘连成团，而影响检测。可将胰酶消化后细胞的保存在含2%BSA的PBS中，防止进一步的损伤。

4．因检测细胞的类型、凋亡诱导剂种类、使用的检测仪器不同，因而流式检测的荧光补偿也不同，因此建议每次检测均需使用未经凋亡诱导处理的细胞作为对照，进行荧光补偿的调节

5.Annexin V染色的常见特性，即使未凋亡的细胞(Annexin V-7-AAD-细胞)，经过染色后在流式图上的位置也会右移，这是正常现象大家不要奇怪。有人曾经试图通过洗去多余抗体来将活细胞群(Annexin V-7-AAD-细胞群)调整到我们通常认为的“阴性细胞”位置，行不通。并且洗过之后，各群细胞比例已经发生改变了。

6.要特别注意在FSC/SSC圈门时，所选细胞范围会对结果造成较大影响，大家自己分析的时候就会发现这一点，所以小伙伴们在分析的时候要把所有分析对象都圈进FSC/SSC的门内，这样才能反映真实情况。

7.本法的优点在于无需固定细胞、染色快速，但是缺点是当细胞膜破裂时Annexin V也可与细胞结合，而且在一些自噬受损的细胞中，PS外翻可能受阻，所以此时Annexin V就不再适合用于早期凋亡检测了。

流式双染凋亡率的计算_Annexin V-FITC/PI双染法流式细胞术检测细胞凋亡相关推荐

流式双染凋亡率的计算_Annexin V-FITC/PI双染细胞凋亡检测方法
一.概述在正常细胞中,磷脂酰丝氨酸只分布在细胞膜脂质双层的内侧,细胞发生凋亡最早期,膜磷脂酰丝氨酸(PS)由脂膜内侧翻向外侧,这一变化早于细胞皱缩.染色质浓缩.DNA片断化和细胞膜的通透性增加等凋亡 ...
流式凋亡率计算_流式细胞术检测细胞凋亡问题
上海优宁维生物科技有限公司 1 . Q : Annexin V R-PE 20 tests 是 BD 公司用于凋亡流式检测的试剂盒, 产品显示种属为人, 请问能否用于大鼠细胞的检测? A :可以. ...
流式凋亡率计算_Annexin V流式检测细胞凋亡的数据分析方法
示例: 细胞用FITC-Annexin V / PI荧光双染细胞凋亡检测试剂盒检测效果图. Jurkat细胞用1μM喜树碱(Camptothecin) (左)或未加药 (右)处理4h,FITC-Ann ...
平流式沉淀池表面负荷怎么计算_竖流式与辐流式沉淀池
全文共1780字,阅读时间约8分钟今天主要讲一下竖流式沉淀池和辐流式沉淀池的结构组成及工艺计算等内容. 竖流式沉淀池顾名思义,竖流式沉淀池的水流在沉淀池中竖向流动.其构造如上图所示,竖流 ...
从Storm和Spark 学习流式实时分布式计算的设计
转自:http://www.dataguru.cn/thread-341168-1-1.html 流式实时分布式计算系统在互联网公司占有举足轻重的地位,尤其在在线和近线的海量数据处理上.而处理这些海量 ...
非常复杂，上双11数据大屏背后的秘密：大规模流式增量计算及应用
回顾大数据技术领域大事件,最早可追溯到06年Hadoop的正式启动,而环顾四下,围绕着数据库及数据处理引擎,业内充斥着各种各样的大数据技术.这是个技术人的好时代,仅数据库领域热门DB就有300+,围绕 ...
流式计算strom,Strom解决的问题,实现实时计算系统要解决那些问题,离线计算是什么,流式计算什么,离线和实时计算区别,strom应用场景,Strorm架构图和编程模型（来自学习资料）
1.背景-流式计算与storm 2011年在海量数据处理领域,Hadoop是人们津津乐道的技术,Hadoop不仅可以用来存储海量数据,还以用来计算海量数据.因为其高吞吐.高可靠等特点,很多互联网公司都 ...
2017云栖大会·杭州峰会：《在线用户行为分析：基于流式计算的数据处理及应用》之《数据可视化：构建实时动态运营数据分析大屏》篇...
实验背景介绍了解更多2017云栖大会·杭州峰会 TechInsight & Workshop. 本手册为云栖大会Workshop之<在线用户行为分析:基于流式计算的数据处理及应用> ...
【详谈 Delta Lake 】系列技术专题之 Streaming（流式计算）
简介: 本文翻译自大数据技术公司 Databricks 针对数据湖 Delta Lake 的系列技术文章.众所周知,Databricks 主导着开源大数据社区 Apache Spark.Delta L ...

流式双染凋亡率的计算_Annexin V-FITC/PI双染法流式细胞术检测细胞凋亡

流式双染凋亡率的计算_Annexin V-FITC/PI双染法流式细胞术检测细胞凋亡相关推荐

最新文章

热门文章