【方法篇】S-棕榈酰化蛋白修饰质谱鉴定方法
本文1000字，阅读需要5分钟
S-脂酰化是长链脂肪酸主要是棕榈酸酯（C16:0, S-棕榈酰化）通过与蛋白质上的硫酯连接与半胱氨酸（Cys）残基共价链接。此可逆的翻译后修饰在真核生物中调节蛋白定位，哺乳动物生理学过程以及人类疾病。
此处文章主要简单介绍了脂肪酸化学标记物与羟胺介导的S-脂酰化蛋白富集的整合和优化，以及直接标记修饰过的Cys残基以定位蛋白上脂质修饰位点。与以前方法相比较起来改进了富集的方法，此方法能够对许多蛋白质S-酰基化位点直接鉴定。
蛋白的主要酰化作用包括S-脂酰化，N-豆蔻酰化，O-脂酰化等，它们在脂肪酸链长度和修饰的氨基酸位点不同。许多研究揭示了脂酰化蛋白的多样性和数量，并强调了这些脂质修饰蛋白在生理和疾病中的潜在功能和调控机制。尽管如此，精确定位蛋白质半胱氨酸残基上的S-脂酰化位点和内生性附着脂质仍然是具有挑战性的工作。
图1
S-棕榈酰化的主要功能是促进蛋白质与细胞膜的结合。蛋白质可以由一个棕榈酰基组成，也可以与更多棕榈基或与其他脂质，如豆蔻酰基。
由于对S-棕榈酰化蛋白分析仍然具有挑战性，由于S-棕榈酰化修饰蛋白亚水平以及疏水性和潜在不稳定的硫代质链的S-脂酰化肽。现在常用的几种方法可以捕获S-脂酰化蛋白以及对目标修饰蛋白进行捕获（如图1所示）。
其中第一中方法是使用烷基标记的棕榈酰化alk-16，用叠氮化物荧光团标记细胞裂解物，然后进行生物进行正交标记，用于检测或亲和用于标记（如图1A所示）。这种方法被广泛应用各种细胞系和组织种的S-脂肪酰基化蛋白的鉴定。
另外一种方法酰基生物素替换（ABE），利用硫酯键 NH2OH集团的灵敏性，选择性的标记和富集S-酰基化蛋白。对细胞进行裂解后，半胱氨酸自由残基与NEM结合，而硫酯键与NH2OH发生水解反应，蛋白中刚被还原的这些硫醇则会被HPDP-biotin标记，然后通过链霉亲和素富集和洗脱，然后随后进行质谱分析。另外，NH2OH介导的酰基捕获方法也可以用来选择性的捕获S-酰基化蛋白（如图1B所示）。
通过NH2OH的处理，自由的硫醇会与亲和珠子形成二硫键，因此可以对目标蛋白进行富集。这两种不同的方法，Acyl-RAC方法并没有发生生物素酰化且是一种直接捕获S-酰基化蛋白和肽段的方法，值得一提的是，这两种依赖于NH2OH的方法并不能区分不同的脂肪酸结构（脂肪酸链长短，饱和度），并且也可能捕获其他类型的S-酰基化蛋白例如真核生物中参与泛素化结合的蛋白。
尽管S-脂酰化修饰蛋白的蛋白组研究手段都是用的上面的类似方法，但是总是会有较高的假阳性结果，例如，曾有研究报道通过蛋白组手在某种细胞系中发现几百个可能发生S-脂酰化候选蛋白，但是验证后实际只有100个左右蛋白可发生S-棕榈酰化修饰。
结合alk-16标记和NH2OH富集方法（acyl-RAC或ABE）可提供更为准确的S-脂酰化蛋白鉴定方法，实际上，最初这种手段的最初是用在哺乳动物细胞和疟原虫的S-脂酰化蛋白鉴定，但是还有更多的S-脂酰化蛋白和磷脂构成亟待确定。
总体上来说，这两种方法比较起来均是通过质谱手段进行鉴定，有部分鉴定的蛋白是重合的，仅仅只有alk-16结合NH2OH这种方法能够鉴定到S-脂酰化蛋白，如果只有alk-16化学报告集团标记只能给出一系列S/N/O脂酰化蛋白，然而Acyl-RAC方法能够检测到一系列S-酰基化蛋白。Acyl-RAC方法能够鉴定出任何蛋白的硫醇上的修饰情况，并且经常被误用为验证S-脂酰化蛋白的方法，如果要鉴定新的S-脂酰化蛋白，建议使用Acyl-RAC和alk-16（+/-NH2OH）结合的方法。
【方法篇】S-棕榈酰化蛋白修饰质谱鉴定方法相关推荐
- 明翰英语教学系列之方法篇
文章目录 传送门 前言 `学习路径&知识体系` 学习技巧 `构词规律` `词汇的偏旁部首` 词义前缀 否定前缀 `in-` mis- dis- de- un- con前缀 out前缀 sur前 ...
- day03--java基础编程：面向对象，构造方法，代码块讲解，this super,static,final,访问修饰符，方法重写，向上/下造型，main方法，抽象类，接口，设计模式，异常，内部类
1 Day06–面向对象1 1.1 面向对象 1.1.1 概念 推荐看的书:Thinking in java 概念:所谓的面向对象是一种编程思想,通过这种思想可以把生活中的复杂事情变得简单化,从原来的 ...
- day03--java基础编程：面向对象，构造方法，代码块讲解，this super,static,final,访问修饰符，方法重写，向上_下造型，main方法，抽象类，接口，设计模式，异常，内部类
1 Day06–面向对象1 1.1 面向对象 1.1.1 概念 推荐看的书:Thinking in java 概念:所谓的面向对象是一种编程思想,通过这种思想可以把生活中的复杂事情变得简单化,从原来的 ...
- 说说牛顿迭代 -- 方法篇
说说牛顿迭代 – 方法篇 写这个笔记主要是最近老在考虑最优化问题.今天刚好发现一个不错的手写公式的工具,加上前几天又发现Win10的Windows Ink比我想象得好用,于是来描几笔.主要是想试试这样 ...
- java static修饰方法_浅析Java中static修饰符
1.概述 static关键字的中文意思是静态的,该修饰符可以修饰字段.方法.内部类.使用该关键字修饰的内容,在面向对象中static修饰的内容是隶属于类,而不是直接隶属于对象的,所以static修饰的 ...
- Java Learning Path（四） 方法篇
Java Learning Path(四) 方法篇 Java作为一门编程语言,最好的学习方法就是写代码.当你学习一个类以后,你就可以自己写个简单的例子程序来运行一下,看看有什么结果,然后再多调用几个类 ...
- Java中final和static对修饰类、方法、属性的总结
一.final 根据程序上下文环境,Java关键字final有"这是无法改变的"或者"终态的"含义,它可以修饰非抽象类.非抽象类成员方法和变量.你 ...
- SCI论文写作训练营笔记汇总03_科技论文写作（方法篇）
4.科技论文写作--方法篇 4.1 准备工作与概述 4.1.2 杂志编辑评估文章的标准 4.2 图表部分的写作方法 4.2.1 为什么使用图表 4.2.2 如何使用图表 4.2.3 如何选择图or表o ...
- 计算机启用时间 查找方式,电脑实用知识技巧 篇六：不需要第三方软件，这种方法查看系统启动时间...
电脑实用知识技巧 篇六:不需要第三方软件,这种方法查看系统启动时间 2019-04-04 09:19:21 0点赞 0收藏 0评论 上次我们说到:开机小助手,要让我们看到开机时间,必须添加自启动项目, ...
- 1.4万+阅读量，这篇JAMA论文，详细阐述临床试验统计方法，非常值得借鉴！
一般来说,JAMA.新英格兰医学杂志等顶级论文,其统计分析计划,都非常详细,动辄5.60页. 但我今天要说的这篇JAMA主刊的论文,统计分析计划,却只有4页纸,但却用浓缩的语言,给我们讲述了针对不同统 ...
最新文章
- solidworks入门
- 13.最为经典的动态规划入门
- go语言 rlock() defer runlock()_Go并发编程之美-读写锁
- mysql 工具图形学_[计算机图形学]贝塞尔曲线
- nginx静态资源反向代理
- python多线程的作用_Python多线程中三个函数的强大功能简介
- vue的插值语法及el和data、methods语法释义
- 浅谈SQL Server 对于内存的管理
- UVA1602 Lattice Animals 网格动物
- nginx反向代理+缓存开启+url重写+负载均衡(带健康探测)的部署记录
- 变化很大！2021年THE世界大学排名出炉，这些中国高校表现出色！
- 信息学奥赛一本通（2051：【例3.1】偶数）
- Objective-C 2.0 with Cocoa Foundation--- 9，内存管理
- coposer 安装 laravel
- 人工鱼群算法及其python实现过程
- 【mysql】触发器的实例详解
- 智能电动汽车充电桩去除安全隐患提高充电效率
- 2021牛客多校#10 F-Train Wreck
- android图片分辨率改变,Android实现改变一个图片的像素值
- BUG日志：无法解析的外部符号 _Direct3DCreate9