荧光法焦磷酸检测试剂盒的制备和准备工作方案
焦磷酸盐 (PPi) 是通过许多生化反应产生的，例如 ATP 水解、DNA 和 RNA 聚合、腺苷酸环化酶形成环状 AMP 以及脂肪酸的酶促活化以形成其辅酶 A 酯。艾美捷 PhosphoWroks™ 焦磷酸盐检测试剂盒为测量焦磷酸盐提供了最可靠的分光光度法。
艾美捷荧光法焦磷酸检测试剂盒使用专有的荧光焦磷酸盐传感器，其荧光强度与焦磷酸盐浓度成正比。与酶偶联焦磷酸盐方法相比，检测方法更容易、更可靠，后者需要至少两种酶来检测焦磷酸盐。该试剂盒提供了测定焦磷酸盐的所有基本成分。该试剂盒已成功用于高通量筛选 (HTS)。
艾美捷荧光法焦磷酸检测试剂盒荧光酶标仪：
励磁 316 纳米
排放 456 纳米
隔断 420 纳米
推荐板 纯黑色
艾美捷荧光法焦磷酸检测试剂盒组件：
组分 A：检测缓冲液 1 瓶（25 毫升）
组件 B：PPi 传感器 1小瓶（冻干粉）
组分 C：焦磷酸盐标准品 1 瓶（1 毫升，50 毫米）
组分 D：二甲基亚砜 1 瓶 (200 µL)
标准溶液的制备：
焦磷酸盐标准品
将 50 μL 的 1 mM 焦磷酸盐标准溶液加入 450 μL 的 ddH2O 或 50 mM Hepes 缓冲液中，以获得 100 μM 焦磷酸盐标准溶液 (PS7)。取 100 μM 焦磷酸盐标准溶液并在 ddH2O 或 50 mM Hepes 缓冲液中进行 1:3 连续稀释，以获得连续稀释的焦磷酸盐标准溶液 (PS6 - PS1)。
准备工作解决方案：
将 25 μL 的 200X PPi 传感器原液加入 5 mL 的检测缓冲液（组分 A）中，并充分混合以制成 PPi 工作溶液。
注意 由于该检测对 PPi 的高灵敏度，使用不含 PPi 的实验室器具和试剂非常重要。DTT ≥ 1 mM 会增加背景，MgCl 2 ≥ 2 mM 会降低响应。
艾美捷荧光法焦磷酸检测试剂盒示例：
图：使用荧光酶标仪在纯黑色 96 孔板中使用 PhosphoWorks™ 荧光焦磷酸盐检测试剂盒测量焦磷酸盐、ATP 和磷酸盐剂量反应。
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