【方法篇】质谱手段分析组蛋白修饰类型
本文2220字，阅读需要7分钟
核小体是染色质最小单元结构，由147个碱基的折叠DNA和8聚体组蛋白组成，组蛋白功能是通过一系列各种蛋白翻译后修饰来进行调节。这些修饰对于核小体的完整性至关重要，因为这些修饰控制着染色质的结构以及招募各种基因调控、DNA损伤修复和染色体凝聚的酶。尽管大部分科学家通过抗体富集的手段对组蛋白修饰进行确定，但是这些方法也有自身的限制，比如通量低，对过度修饰蛋白有偏好，因抗原表位可能被修饰所覆盖。
组蛋白修饰
表观遗传学定义为是研究基因的核苷酸序列不发生改变的情况下，基因表达的可遗传的变化的一门遗传学分支学科。表观遗传学调控对于生物体发育过程中起着非常重要作用，因为即使其DNA没有发生任何变化，但是生物体也会经历着显著的变化。
表观遗传调控需要几个关键的组成部分，包括组蛋白翻译后修饰(PTMs)、组蛋白变体、非编码RNA、DNA甲基化和DNA结合因子，每一个都通过不同的机制影响基因表达。
例如，DNA甲基化是一种较稳定的修饰，能够抑制基因翻译，而组蛋白变体和组蛋白修饰变化更为动态，并且可以通过各种形态影响染色质。组蛋白修饰主要分布在蛋白N端，是蛋白质暴露程度和变化程度最高的蛋白区域。然而，与普通蛋白相比核小体核心也有较高的修饰程度。尽管在过去十年中组蛋白修饰定义很确切，但是仍然有很多与这些修饰相关的功能并不明确。很大程度上由于大多数组蛋白并不是单独工作的，而是与其他进行协同作用，以改变特定的生物学过程例如基因转录。例如，p21基因上的组合修饰H3S10K14ac激活了它的转录，而这两个修饰中任意其中一个单独发生修饰都不会激活它的转录。HP1蛋白通过识别H3K9me2/me3将染色质聚集，并且将其周围的核小体进行修饰。但是当周边临近的S10发生磷酸化后，HP1不能结合H3K9me2/3，H3K4乙酰化抑制spCHp1蛋白与H3K9me2/3的结合。
这些例子强调了实现组蛋白功能变化并不是因为单一修饰改变而改变，而是各种不同修饰共同作用的效果。
分析方法
其修饰的复杂性也增加了分析的困难程度，因为组蛋白之间通常含有相似的序列，并且起着不同的作用。当然随之而来的是各种科学手段去检测组蛋白修饰，例如WB是一种常见的以抗体为基础的技术手段，被运用在确定各种组蛋白。
然而这种手段有一些自身的限制：
1．不能确定未知的蛋白修饰，只能确定一种已知的修饰
2．因为组蛋白之间存在相同的修饰，因此会出现偏差而影响对目标修饰的亲和特异性
3．不能识别多种修饰类型
4．相似的组蛋白之间会发生相互反应
有科学家研究过超过25%的商业化抗体未能成功检特异检测成功，在特异性的抗体中，20%以上的抗体在染色质免疫沉淀实验中失败。质谱是较为适合研究新型修饰或者几种组合修饰的新型分析工具，已经广泛应用于组蛋白修饰鉴定中。
这主要是因为质谱的高灵敏度和高精准度，以及能够进行大规模分析的能力。自上而下的策略是目前最常用的以质谱为工具的蛋白质组学的分析策略，可以对组蛋白酶解成短肽（5-20aa），并通过质谱进行高通量分析。然而组蛋白对于通过这种自下而上的检测策略却是带来了较大的挑战，因为其内部富含赖氨酸和精氨酸，
因此，进行胰酶酶切的过程中会导致肽段被处理的过于短小而不能通过液相保留并且也不能清楚的确定修饰所发生的位点。
为了规避上述问题，下面文章所采用的方法是将赖氨酸和N端进行化学衍生化处理。本方法中的丙酸酐的使用是进行化学衍生化的较为有效的处理试剂，衍生化作用可以将氨基酸的未发生修饰的ɛ氨基集团进行单甲基化处理，可是后续胰酶仅能和C端的精氨酸发生反应。氨基端的衍生物化可以增加肽段的疏水性，从而使反色色谱能够保留，在这里如图1所示描述了自上而下的蛋白质组学手段对组蛋白修饰进行分析。
图1
该实验策略实现了单组蛋白修饰的量化以及组蛋白修饰组合修饰的类型确定。
【方法篇】质谱手段分析组蛋白修饰类型相关推荐
- python象限判断_玩数据之数据方法篇—四象限分析法—附EXCEL+Python案例
一. 怎么使用(二维)四象限分析 案例一,以一个电子商务公司为例,老板需要评估销售的商品类别的整体情况.那么,参考二维四象限分析的套路--直接可以按照销售金额,以及销售利润两个方面进行(具体直接套用下 ...
- 软件方法（下）分析和设计第9章分析 之 分析类图——案例篇（20211228更新）
软件方法(下)分析和设计第8章分析 之 分析类图--知识篇(20211227更新) 鸳鸯扣,宜结不宜解 <身似摇红烛影>,词:唐涤生,曲:王粤生,唱:红线女,1954 可到此处下载本文档最 ...
- 基于深度学习的脑电图识别 综述篇(三)模型分析
作者|Memory逆光 本文由作者授权分享 导读 脑电图(EEG)是一个复杂的信号,一个医生可能需要几年的训练并利用先进的信号处理和特征提取方法,才能正确解释其含义.而如今机器学习和深度学习的发展,大 ...
- 【阿里妈妈营销科学系列】第八篇：增强分析在营销分析场景下的实现和应用...
丨目录: · 背景 · 业务场景 · 基本概念 · 阿里妈妈智能洞察系统Autolnsight · 应用场景和案例 · 总结 · 关于我们 ▐ 背景 随着以数据驱动业务增长的发展趋势,"数据 ...
- Spring 获取 request 的几种方法及其线程安全性分析
转载自 Spring 获取 request 的几种方法及其线程安全性分析 本文将介绍在Spring MVC开发的Web系统中,获取request对象的几种方法,并讨论其线程安全性. 一.概述 在使用 ...
- SCI论文写作训练营笔记汇总03_科技论文写作（方法篇）
4.科技论文写作--方法篇 4.1 准备工作与概述 4.1.2 杂志编辑评估文章的标准 4.2 图表部分的写作方法 4.2.1 为什么使用图表 4.2.2 如何使用图表 4.2.3 如何选择图or表o ...
- 创建线程的三种方法_Netty源码分析系列之NioEventLoop的创建与启动
前言 前三篇文章分别分析了 Netty 服务端 channel 的初始化.注册以及绑定过程的源码,理论上这篇文章应该开始分析新连接接入过程的源码了,但是在看源码的过程中,发现有一个非常重要的组件:Ni ...
- c语言回溯实验报告,实验报告: 人脸识别方法回溯与实验分析 【OpenCV测试方法源码】...
实验报告: 人脸识别方法回顾与实验分析 [OpenCV测试方法源码] 趁着还未工作,先把过去做的东西整理下出来~ (涉及个人隐私,源码不包含测试样本,请谅解~) 对实验结果更感兴趣的朋友请直接看第5章 ...
- 数据分析可视化02 建设方法：数据可视化分析的庖丁之术
上一课时,我介绍了数据可视化分析的基本概念,通过对比的方式,讲述了数据可视化分析的概念定义和知识体系,相信你对数据可视化分析已经有了一个基本的了解.本课时,我将给大家分享数据可视化分析的方法论,内容包 ...
- Go 学习笔记（35）— Go 接口 interface （接口声明、接口初始化、接口方法调用、接口运算、类型断言、类型查询、空接口）
1. 接口概念 接口是双方约定的一种合作协议.接口实现者不需要关心接口会被怎样使用,调用者也不需要关心接口的实现细节.接口是一种类型,也是一种抽象结构,不会暴露所含数据的格式.类型及结构. 接口内部存 ...
最新文章
- Dataset：Big Mart Sales数据集的简介、下载、案例应用之详细攻略
- 机器学习 聚类篇——python实现DBSCAN（基于密度的聚类方法）
- 数据库密码过期 怎么修改
- 数据结构(8)----栈与队列之循环队列
- 使用函数指针实现父类函数调用子类函数的两种方式
- Linux: I/O多路转接之poll（有图有代码有真相！！！）
- 程序员面试金典 - 面试题 04.03. 特定深度节点链表（BFS）
- 最近自学 Asp.net MVC 小总结
- make_pair 简单使用
- C语言丨线性表（四）：循环链表
- 小米6android版本更新,钉子户小米6的新生，换电池、背盖，升级android11
- [已解决] org.hibernate.HibernateException：没有活动事务，get无效
- 九大厂商联合推出「快应用」，围攻微信？
- android 控件颜色随焦点变化实例
- IAR 软件激活步骤
- ARINC429说明书
- WindRiver编译小结
- Canvas Scaler
- 程序猿头头(数组应用)
- 有人说“星座对自己的运势预测和性格描述很准”。请谈读你的看法。 “星座热”的社会学解读