稳定性同位素示踪技术和放射性同位素示踪技术的研究进展

同位素示踪所利用的放射性核素或稳定性核素及它们的化合物，与自然界存在的相应普通元素及其化合物之间的化学性质和生物学性质是相同的，只是具有不同的核物理性质。因此，就可以用同位素作为一种标记，制成含有同位素的标记化合物（如标记食物，药物和代谢物质等）代替相应的非标记化合物。利用放射性同位素不断地放出特征射线的核物理性质，就可以用核探测器随时追踪它在体内或体外的位置、数量及其转变等，稳定性同位素虽然不释放射线，但可以利用它与普通相应同位素的质量之差，通过质谱仪，气相层析仪，核磁共振等质量分析仪器来测定。放射性同位素和稳定性同位素都可作为示踪剂（tracer），但是，稳定性同位素作为示踪剂其灵敏度较低，可获得的种类少，价格较昂贵，其应用范围受到限制；而用放射性同位素作为示踪剂不仅灵敏度，测量方法简便易行，能准确地定量，准确地定位及符合所研究对象的生理条件等特点。

同位素标记法是利用放射性同位素作为示踪剂对研究对象进行标记的微量分析方法，生物学中常用的放射性同位素（原子核不稳定会发生衰变，发出α射线或β射线或γ射线的同位素）有3H、14C、 32P、35S、 45Ca、51Cr、59Fe、125I、131I、198Ag等，稳定性同位素（原子核结构稳定，不会发生衰变的同位素）有2H、13C、15N、18O等。

同位素标记法可用于追踪物质的运行和变化规律，在高中生物教材中多次出现，总结如下：

稳定性同位素示踪技术

1．光合作用中氧气的来源

1939年，鲁宾和卡门用18O分别标记H2O和CO2，然后进行两组对比实验：一组提供H2O和C18O2，另一组提供H218O和CO2。在其他条件相同情况下，分析出第一组释放的氧气全部为O2，第二组全部为18O2，有力地证明了植物释放的O2来自于H2O而不是CO2。

2．DNA的半保留复制

1957年，美国科学家梅塞尔森和斯坦尔用含15N的培养基培养大肠杆菌，使之变成“重”细菌，再把它放在含14N的培养基中继续培养。在不同时间取样，并提取DNA进行密度梯度离心，根据轻重链浮力等的不同，就分出新生链和母链，这就证实了DNA复制的半保留性。

放射性同位素示踪技术

1．分泌蛋白的合成与分泌

20世纪70年代，科学家詹姆森等在豚鼠的胰腺细胞中注射3H标记的亮氨酸。3min后被标记的亮氨酸出现在附有核糖体的内质网中；17min后，出现在高尔基体中；117min后，出现在靠近细胞膜内侧的囊泡中及释放到细胞外的分泌物中。由此发现了分泌蛋白的合成与分泌途径：核糖体→内质网→高尔基体→囊泡→细胞膜→外排。

2．光合作用中有机物的生成

20世纪40年代美国生物学家卡尔文等把单细胞的小球藻短暂暴露在含14C的CO2里，然后把细胞磨碎，分析14C出现在哪些化合物中。经过10年努力终于探索出了光合作用的“三碳途径”——卡尔文循环。为此，卡尔文荣获“诺贝尔奖”。

3．噬菌体侵染细菌的实验

1952年，赫尔希和蔡斯以T2噬菌体为实验材料，用35S、32P分别标记噬菌体的蛋白质外壳和DNA，再让被35S、32P分别标记的两种噬菌体去侵染大肠杆菌，经离心处理后，分析放射性物质的存在场所。此实验有力证明了DNA是遗传物质。

4．基因工程

在目的基因的检测与鉴定中，采用了DNA分子杂交技术（如32P）。将转基因生物的基因组DNA提取出来，在含有目的基因的DNA片段上用放射性同位素作标记，以此为探针使之与基因组DNA杂交，如果显示出杂交带，就表明目的基因已导入受体细胞中。

另外，还可采用同样方法检测目的基因是否转录出了mRNA，不同的是从转基因生物中提取的是mRNA。

5．基因诊断

基因诊断是用放射性同位素（如32P）、荧光分子等标记的DNA分子作探针，依据DNA分子杂交原理，鉴定被检测样本上的遗传信息，从而达到检测疾病的目的。

示踪原子不仅用于科学研究，还用于疾病的诊断和治疗。例如，射线能破坏甲状腺细胞，使甲状腺肿大得到缓解。因此，碘的放射性同位素就可用于治疗甲状腺肿大。

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4-methylpyridin-2-amine-D6

4-三氟甲氧基苯胺-15N

4-溴-2-羧酸噻唑-13C

4-溴-2-羧酸甲酯噻唑-13C

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L-瓜氨酸-D2

L-瓜氨酸-D2-13C-15N2

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乙胺-D2

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乙酰乙酸乙酯-13C4

乙酰乙酸乙酯-13C4-D5

乙酰乙酸乙酯-3,4-13C2

乙酰乙酸甲酯-1,2-13C2

乙酰乙酸甲酯-13C4

乙酰乙酸甲酯-13C4-D3

乙酰乙酸甲酯-3,4-13C2

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乙酰唑胺-2-13C

乙酰苯胺-13C6

乙酸-1-13C

乙酸-13C2

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乙酸酐-1,1-13C2

乙酸酐-2,2-13C2

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乙酸钠-13C2

乙酸钠-2-13C

二乙胺-D10

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对硝基苯酚-13C6

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尿嘧啶-13C-15N2

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尿素-13C-15N2

尿素-15N2

巴比妥酸-13C

巴比妥酸-13C-15N2

氯苄-13C6

氯苄-alpha-13C

溴乙酸乙酯-2-13C

溴苯-13C6

甘氨酸-1,2-13C2-15N

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