flog和flag,FLAG标签和3xFLAG标签的序列
FLAG标签是是常用的用于检测过表达蛋白的标签。
常用的形式有FLAG和3xFLAG,常见的氨基酸序列为:
FLAG:
氨基酸序列:
DYKDDDDK
DNA编码序列:
GATTACAAGGACGACGATGACAAG
3xFLAG--第一种形式:
氨基酸序列:
DYKDDDDKGDYKDDDDKIDYKDDDDK
DNA编码序列:
GATTACAAGGATGACGACGATAAGGGAGATTACAAGGATGACGACGATAAGATCGATTACAAGGATGACGACGATAAG
3xFLAG--第二种形式:
氨基酸序列:
DYKDHDGDYKDHDIDYKDDDDK
DNA编码序列:
GACTACAAAGACCATGACGGTGATTATAAAGATCATGACATCGACTACAAGGATGACGATGACAAG
3xFLAG--第三种形式:
氨基酸序列:
DYKDDDDKDYKDDDDKDYKDDDDK
DNA编码序列:
GATTACAAGGATGACGACGATAAGGACTATAAGGACGATGATGACAAGGACTACAAAGATGATGACGATAAA
经常接到电话来咨询这几个FLAG形式的区别,在这里我就大家关心的问题做个统一解释:1. 这几种形式的FLAG肯定是有不同的,至少长度不同。为什么要构建长度不同的FLAG标签呢?是这样的,大多数情况下FLAG标签会构建到蛋白的N端或者C端,而且大多数情况下蛋白的N端或者C端是游离在蛋白表面的,那么在这种情况下FLAG和3xFLAG没有什么区别,抗体都能结合得到。但是也有时候蛋白末端会被折叠到蛋白内部,或者被其他结合蛋白所遮蔽,那么更长的FLAG更有利于抗体结合表位的暴露,从而被抗体所结合。2. 这几种形式都有相同的地方,就是它们都含有DDDDK,而这个通常是FLAG抗体的结合表位(抗体结合表位长度一般为4-7个氨基酸),所以对大家常用的FLAG抗体来说,这几种标签没有什么区别,都可以识别。3. 3xFLAG会的抗体结合信号会不会比1x的更强?我认为不会,抗体结合的表位长度一般4-7个氨基酸,加上抗体本身非常巨大,抗体产生的空间位阻容不下第二个抗体结合在同一个3xFLAG上。
Souce: 纽普生物 2017-05-09
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