免疫荧光实验相关的注意事项汇总

免疫荧光实验原理很简单，其实就是使用荧光二抗，并在荧光显微镜下采集图像，其它的和IHC或ICC区别不大。

但是，想要得到良好的结果却很难，大家经常会遇以下问题：

（1）目标蛋白的荧光很弱，导致组间差异并不明显，造成假阴性结果；

（2）蛋白荧光太强，甚至形成非特异性的标记，一些背景染色可能被误认为阳性区域，造成假阳性结果；

（3）DAPI染细胞核时，加入的试剂太多，造成高背景染色；

（4）组织切片预处理不当或采用石蜡切片，导致高背景染色；

（5）采集图像过程不当，导致原始图像不佳，直接影响后续半定量分析。

可以看出，无论是荧光太强或者太弱，都会造成免疫荧光实验结果差或者失败。绝对消除影响是做不到的，希望大家能认识到这一点。针对这些问题，我们只能尽可能地优化，减弱影响。

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接下来，只讲干货

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