GST pull down实验—gst融合蛋白沉降技术原理

GST-pull-down:

利用GST融合蛋白沉降技术，将靶蛋白与GST标签蛋白在细菌体内进行融合表达，纯化获取融合表达蛋白。其原理是：靶蛋白-GST融合蛋白亲和固化在谷胱甘肽亲和树脂上，作为与目的反比亲和的支撑物，充当诱饵蛋白，目的蛋白溶液裹住纯化，即可捕获与之相互作用的俘获蛋白，洗脱结合物，通过SDS-page电泳分析，或联用WB和MS检测，可验证蛋白间的相互作用或筛选获取相应的目的蛋白。我们公司通过磁珠结合捕获，形成复合体形式，更加灵敏和针对性获取结合蛋白：磁珠与GST抗体孵育结合，通过与样品裂解液孵育，形成磁珠-GST抗体-GST融合蛋白-互作结合蛋白综合体，进而纯化获取目的结合蛋白

服务流程：

1.构建GST-靶蛋白融合表达载体

2. GST标签抗体，WB检测融合蛋白的表达情况

3. 细胞裂解，获取总蛋白裂解液

4. GST-pull-down调取互作结合蛋白

5. 对结合蛋白进行纯化

客户提供：

1. 已验证含有融合蛋白表达的样品（验证表达融合蛋白的WB结果图）

2. 可用于WB检测和IP实验的GST标签抗体

如期提供：

1.原始数据、结果图片

2.标准实验报告

3.SCI标准Result Figure

2.2项目名称：RNA pull-down/检测RNA与其结合蛋白相互作用

技术服务描述

RNA pull-down是检测RNA结合蛋白与其靶RNA之间相互作用的主要实验手段之一。RNA pull-down使用体外转录法标记生物素RNA探针，然后与胞浆蛋白提取液孵育，形成RNA-蛋白质复合物。该复合物可与链亲和素标记的磁珠结合，从而与孵育液中的其他成分分离。复合物洗脱后，通过Western Blot实验检测特定的RNA结合蛋白是否与RNA相互作用。

服务流程

1. 根据研究目的决定研究方案

2. DNA序列T克隆

3. RNA生物素探针合成

4. RNA pull-down实验

5. Western Blot检验（若需质谱分析请另外咨询）

6. 数据分析及Figure制作

服务优势

1. 可鉴定RBP的结合RNA motif预测，具有更强的说服力

2. 采用Western Blot检测，具有更高的精密度

3. 提供各项完整对照，具有更严谨的结果

4. 结果提供SCI标准Figure，可直接用于文章

客户提供

1. 目的蛋白抗体（可用于Western Blot）及其说明书

2. 需检测的细胞样品

3. 目的基因、目的蛋白信息

如期提供

1. 原始数据、结果图片（包括Input、阳性及阴性对照结果）

2. 标准实验报告（包括详细的材料与方法）

3. SCI标准Result Figure

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