如何用Primer6批量设计引物（非全cDNA引物）

在研究某个基因或者蛋白A的表达量时，我们往往需要通过Real-time qPCR来验证或者佐证实验结果，从而对基因表达量的Fold change进行评估。Real-time qPCR的关键步骤之一是设计合适的引物，但是如果需要验证的基因过多，这项工作就会变得十分繁琐。因此，在本次专题中，小编将介绍如何批量设计引物。

1.打开含基因ID的原始文件——引物设计原始DNA信息

2.选中Gene id中的所有基因名称，复制

图1

3.打开Tbtools，依次选择Sequence Toolkits；Fasta tools；Fasta Extractor

4.将gene id粘贴到对应位置，并按上图所示将“小麦cDNA库”拖到第一个框，在第二个框设置输出文件（例子中的输出文件名为out.fa）

5.点开始提取序列（如果只需要少量基因，则可以在NCBI查找相关的cDNA序列）

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