细胞克隆形成实验的目的及实验过程的注意事项

细胞克隆形成实验是测定单个细胞增能力的有效方法，常用于抗肿瘤药物敏感性测定、基因治疗、肿瘤放射生物学等方面的研究。细胞克隆形成实验的常用方法有平板克隆形成和软琼脂克隆形成两种。

平板克隆形成实验与软琼脂克隆形成实验的区别在于前者操作简便，可直接将细胞接种于培养器皿培养，细胞间泌的促生长因子可在培养液中扩散，有助于克隆形成率的提高，适用于贴壁生长细胞。而软琼脂克隆形成实验培养基需添加软琼脂，以模拟体内生长环境，适用于悬浮细胞。

细胞克隆形成实验的注意事项：

1. 实验成功的关键之一是细胞悬液的制备与接种密度，细胞一定要分散均匀，不能有细胞团，接种密度不能过大。

2. 接种完毕后，需将培养基置于37℃ 5% CO2及饱和湿度的细胞培养箱中培养2~3周，期间需每隔3 d换一次液，换液过程需缓慢加入培养基，避免将细胞吹起。

3. 当肉眼可观察到培养皿中出现克隆后终止培养，弃上清，用PBS小心冲洗2~3次，而后固定15 min、结晶紫染色20 min，洗去染色液后观察计数，克隆形成率=（克隆数/接种细胞数）×100%。

4. 在软琼脂克隆形成实验中，需配置下层软琼脂和上层软琼脂，前者是为防止细胞贴附生长，后者是作为营养补充剂以及为防止下层琼脂胶干燥。

5. 软琼脂与细胞液混合时温度不宜超过40℃，否则将会烫伤/死细胞。

6. 琼脂经灭菌后应分装备用，反复加热易导致琼脂降解而产生毒性，且其硬度也会有所下降。

7. 不同细胞的生长能力有所差异，若细胞克隆率过低，可在培养基中添加胰岛素等促克隆形成物质。

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