三代测序的基本原理、组装方法和应用场景

  • PB/Nanopore测序原理及优缺点介绍

    • PB:光信号,荧光基团结合碱基测序
    • Nanopore:电信号
    • 优点
      • 无GC偏好性
    • 缺点
      • 错误率较高
      • 有效孔只有三分之一
  • 三代测序组装方法
    • 参考文献:Comprehensive evaluation of non-hybrid genome assembly tools for third-generation PacBio long-read sequence data
    • 常用软件
      • Canu

        • 纠错、修剪、组装
      • FALCON(PB自主开发)
        • 可做二倍体和单倍体
        • 可通过Hi-C数据对二倍体进行组装
      • MECAT
      • 文献结论

  • 三代测序应用场景
    • 基因组

      • 测序优势

        • 可价格低contig数量,减少后续拼接与注释的工作量,节省时间
        • 提高了基因组组装的完整度
      • 算法
        • OLC
        • DBG
    • 表观遗传学(甲基化)
      • 总量鉴定
      • 高通量测序
    • 宏基因组
    • 全场转录本
    • 全长16S
  • 二代+三代组装分析比较
    • Nanopore组装效果比较好
    • 优势
      • 基因全面
      • 组装N50效果好
      • binning高质量基因组

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