差异分析完整解决方案

写在前面

最初这份脚本是这样的：R语言一键批量完成差异统计和可视化，当时我们发布的，但是我封装的比较严重，每个步骤不能分开跑，只能按照流程从一而终，后来我做升级版：查看升级版本，将多重比较方法和可视化进行了丰富，再后来我发现正态分布函数错误，所以又进行了更正：查看更正版本，最后就是咱们这篇教程了.

前一段时间推出了包存在一些细节问题：譬如：

非参数检验无字母标注混乱。
其次，由于我在做差异检测和出图的时候没有指定同样的数据，导致显著性字母标记错位，所以i设置要相同，之前我没有设置相同，所有将其他列的差异检测结果映射到了别的数据，导致上一篇推送字母标注问题。

目前本包函数其他函数有些小问题，我已经修正，所以大家使用起来应该放心，我修改了示例数据，增加到每个处理6个重复，所以可以更好的作为示例数据再次为大家演示一遍。

感谢大家的关注，也会让这个包更加好用，本次处理修正一些错误之外，我还添加的新的出图样式。来源于2020年2月刚刚online的NBT文章。大家继续往后看吧。

EasyAovWlxPlot 使用指南

安装EasyAovWlxPlot包

library(devtools)
install_github("taowenmicro/EasyAov")# 如果国外不可用，则使用国内备份安装
remotes::install_git('https://gitee.com/wentaomicro/EasyAovWlxPlot')

导入包和数据，数据均来自真实试验和文公开文献下载，通过调整分组加入。

# 导入差异分析包
library(EasyAovWlxPlot)
# 导入作图所需要的ggplot包
library(ggplot2)
#使用内置数据1
data(data_wt)
#内置数据2
data(env)

基于单个指标的统计分析

正态检验和方差齐性分析，使用?NorNorCVTest查看帮助信息，你会发现目前帮助信息都是使用中文写的，不过随着包的逐渐成熟，和功能的不断完善，将逐渐使用英文编写帮助文档。

# 使用?NorNorCVTest查看帮助信息
##使用案例
NorCV = NorNorCVTest(data = data_wt, i= 4,method_cv = "leveneTest")
#提取正态检验结果
NorCV[[1]]
#提取方差齐性检验结果
NorCV[[2]]

##             No         Name         W   p.value norm.test
## 1            1           CF 0.9385422 0.6474760      Norm
## 2            2           CK 0.9306138 0.5848500      Norm
## 3            3          Rhi 0.9651627 0.8585061      Norm
## 4            4           WT 0.9756280 0.9278774      Norm
## 5 Test Method: Shapiro-Wilk        NA        NA      <NA>

norm.test会按照分组告诉大家是否符合正态分布。

方差分析(aovMcomper)

data:输入数据框，第一列为样本编号，第二列为分组，注意分组标签必须设定为group，第三列以后就是测定或者收集的指标了
i:代表您想要进行统计的列，比如：第三列：i = 3
method_Mc:选择需要使用的多重比较方法，这里又多种方法可供选择：method_Mc == “LSD”;method_Mc == “SNK”;method_Mc == “Duncan”;method_Mc == “scheffe”

# ?aovMcomper
result= aovMcomper (data = data_wt, i= 5,method_Mc = "Tukey")
# 提取多重比较结果
result[[1]]
#提取方差检验结果
result[[2]]

提取多重比较结果

##     groups group
## CF     a      CF
## CK      b     CK
## Rhi      c   Rhi
## WT     ab     WT

结果中多重比较的展示全部使用字母表示了，虽然许多多种比较方法默认展示方式不同，但是我已经在包中将这些展示方式调整一致为字母。

非参数检验

两个参数代表的意义与方差分析的两个相同；

data:输入数据框，第一列为样本编号，第二列为分组，注意分组标签必须设定为group，第三列以后就是妮妮测定或者收集的指标了
i:代表您想要进行统计的列，比如：第三列：i = 3

# ?KwWlx
res = KwWlx(data = data_wt, i= 5)
# 调用非参数两两比较结果：字母标记展示
res[[1]]
#表格展示两两之间差异结果
res[[2]]

调用非参数两两比较结果：字母标记展示

##     groups group
## CF       a    CF
## CK      ab    CK
## Rhi      c   Rhi
## WT       b    WT

表格展示两两之间差异结果

## # A tibble: 6 x 8
##   .y.   group1 group2       p p.adj p.format p.signif method
##   <chr> <chr>  <chr>    <dbl> <dbl> <chr>    <chr>    <chr>
## 1 count CF     CK     0.0651  0.13  0.0651   ns       Wilcoxon
## 2 count CF     Rhi    0.00500 0.025 0.0050   **       Wilcoxon
## 3 count CF     WT     0.00630 0.025 0.0063   **       Wilcoxon
## 4 count CK     Rhi    0.00639 0.025 0.0064   **       Wilcoxon
## 5 count CK     WT     0.394   0.39  0.3939   ns       Wilcoxon
## 6 count Rhi    WT     0.00216 0.013 0.0022   **       Wilcoxon

差异可视化方案（两种差异表示，三种图形展示）

柱状图展示方差分析或非参数检验结果（aovMuiBarPlot）

在这个包中将差异检测和出图部分分离，方便选择合适的图表和差异可视化的策略。最终要的参数是result ：为前面差异分析结果中的第一个表单，格式为第一列差异显著字母，第二列分组标签，列名，分组标签。如果只是用可视化的函数，直接从外面导入类似数据即可。

# ?aovMuiBarPlot
###----使用方差检验结果和多重比较结果做展示：  柱状图展示
PlotresultBar = aovMuiBarPlot(data = data_wt, i= 5,sig_show ="abc",result = result[[1]])
#提取结果
PlotresultBar[[1]]
#提取方差分析或非参数检验结果
PlotresultBar[[2]]

# ?aovMuiBarPlot
###----使用方差检验结果和多重比较结果做展示：  柱状图展示
PlotresultBar = aovMuiBarPlot(data = data_wt, i= 5,sig_show ="line",result = result[[1]])
#提取结果
PlotresultBar[[1]]
#提取方差分析或非参数检验结果
PlotresultBar[[2]]

data：输入数据框，第一列为样本编号，第二列为分组，注意分组标签必须设定为group，第三列以后就是测定或者收集的指标了
i：代表您想要进行统计的列，比如：第三列：i = 3
sig_show：代表差异展示方式；sig_show ="abc"是使用字母表示;sig_show ="line"是使用连线和星号表示；如果是NA，那么就不显示显著性结果
result：代表显著性差异分析结果，是一个数据框，第一列是显著性差异字母，第二列是分组group

箱线图展示方差分析或非参数检验结果（aovMuiBoxP）

data：输入数据框，第一列为样本编号，第二列为分组，注意分组标签必须设定为group，第三列以后就是测定或者收集的指标了
i：代表您想要进行统计的列，比如：第三列：i = 3
sig_show：代表差异展示方式；sig_show ="abc"是使用字母表示;sig_show ="line"是使用连线和星号表示；如果是NA，那么就不显示显著性结果
result：代表显著性差异分析结果，是一个数据框，第一列是显著性差异字母，第二列是分组group

# ?aovMuiBoxP
# #使用案例
PlotresultBox = aovMuiBoxP(data = data_wt, i= 5,sig_show ="abc",result = result[[1]])
# 提取检验结果
PlotresultBox[[2]]
#提取图片
p = PlotresultBox[[1]]
p

# ?aovMuiBoxP
# #使用案例
PlotresultBox = aovMuiBoxP(data = data_wt, i= 5,sig_show ="line",result = result[[1]])
# 提取检验结果
PlotresultBox[[2]]
#提取图片
p = PlotresultBox[[1]]
p

点柱图-完美解决柱状图无法展示样本信息的缺陷

# result= aovMcomper (data = data_wt, i= 5,method_Mc = "Tukey")
# # 提取多重比较结果
# result[[1]]
PlotresultBox = aovMuiBoxBarP(data = data_wt, i= 5,sig_show ="abc",result = result[[1]])
#提取图片
p = PlotresultBox[[1]]
p

EasyAovWlxPlot包为什么能完美解决差异分析呢.因为他比你想象的要强大。下面使用连线形式展示差异，显著的差异按照标注星号，不显著的标注ns。

PlotresultBox = aovMuiBoxBarP(data = data_wt, i= 5,sig_show ="line",result = result[[1]])
#提取图片
p = PlotresultBox[[1]]
p

多指标模式

多个指标同时做正态检验和方差齐性分析（MuiNorCV）

这里对多组数据进行分析，结果我是用T或F代表，方便阅读。

data：输入数据框，第一列为样本编号，第二列为分组，注意分组标签必须设定为group，第三列以后就是测定或者收集的指标了
num：代表您想要进行统计的列,这里可以输入多个列，只需要指定列号即可：例如：num = c(4:6)
method_cv：代表选择方差齐性的方法，有两种可供选择：method_cv == “bartlett.test” ;method_cv == “leveneTest”

dim(data_wt)
# ?MuiNorCV
# 使用案例
norCv = MuiNorCV(data = data_wt,num = c(4:10),method_cv = "leveneTest")
#展示正态检验和方差齐性结果
norCv

##      DI      cor    CV
## [1,] "AP"    "TRUE" "TRUE"
## [2,] "bac"   "TRUE" "FALSE"
## [3,] "fun"   "TRUE" "TRUE"
## [4,] "micro" "TRUE" "TRUE"
## [5,] "NH4.N" "TRUE" "TRUE"
## [6,] "NO3.N" "TRUE" "FALSE"
## [7,] "pH"    "TRUE" "TRUE"

这里由于指标比较多，所以我将结果进行简化，直接使用ture和false来提示大家，cor是正态性检测组，cv是方差齐性检测。

多个指标方差检验（MuiaovMcomper）

data：输入数据框，第一列为样本编号，第二列为分组，注意分组标签必须设定为group，第三列以后就是测定或者收集的指标了
num：代表您想要进行统计的列,这里可以输入多个列，只需要指定列号即可：例如：num = c(4:6)
method_Mc：选择需要使用的多重比较方法，这里又多种方法可供选择：method_Mc = “LSD”;method_Mc = “SNK”;method_Mc = “Duncan”;method_Mc =“scheffe”

# ? MuiaovMcomper
# #使用案例
result = MuiaovMcomper(data = data_wt,num = c(4:6),method_Mc = "Tukey")
#提取每个指标方差检验多重比较结果
result

##      AP bac fun
## CF  a   a    a
## CK    c  b   a
## Rhi  b    c   b
## WT   bc ab   a

同样，多个指标展示按照指标每列为一组检测结果。

多个指标非参数检验（MuiKwWlx）

data：输入数据框，第一列为样本编号，第二列为分组，注意分组标签必须设定为group，第三列以后就是测定或者收集的指标了
num：代表您想要进行统计的列,这里可以输入多个列，只需要指定列号即可：例如：num = c(4:6)

# ? MuiKwWlx
# #使用案例
result = MuiKwWlx(data = data_wt,num = c(4:6))
#提取每个指标非参数检验多重比较结果
result

##     AP bac fun
## CF   a   a  ab
## CK   b  ab   a
## Rhi  c   c   c
## WT   d   b   b

结果和多组方差分析结果一样。很好用于后面的出图，同样也适合自己导入数据，使用出图

多组数据可视化差异分析结果：柱状图（MuiPlotresultBar）

多组指标分开出图，比较麻烦的是图形的保存，如果还需要让你一个一个保存图片，那也是相当繁琐的，所以这里我设置了自动保存，也只有这种方式是自动保存，其他单个，多组分面图形较少，所以就可以自己保存。

我让该函数自动保存每个指标的出图文件到当前文件夹中。这些文件以该指标名称命名；

data：输入数据框，第一列为样本编号，第二列为分组，注意分组标签必须设定为group，第三列以后就是妮妮测定或者收集的指标了
num：代表您想要进行统计的列,这里可以输入多个列，只需要指定列号即可：例如：num = c(4:6)
sig_show：代表差异展示方式；sig_show ="abc"是使用字母表示;sig_show ="line"是使用连线和星号表示；如果是NA，那么就不显示显著性结果
result：代表显著性差异分析结果，是一个数据框，每一列是显著性标记字母,MuiKwWlx

# ?MuiPlotresultBar
# # #使用案例
result = MuiKwWlx(data = data_wt,num = c(4:6))
result
# #结果直接输出到文件夹中
MuiPlotresultBar(data = data_wt,num = c(4:6),result = result ,sig_show ="line")

##     AP bac fun
## CF   a   a  ab
## CK   b  ab   a
## Rhi  c   c   c
## WT   d   b   b

多组数据可视化差异分析结果：箱线图（MuiPlotresultBox）

我让该函数自动保存每个指标的出图文件到当前文件夹中。这些文件以该指标名称命名；

data：输入数据框，第一列为样本编号，第二列为分组，注意分组标签必须设定为group，第三列以后就是妮妮测定或者收集的指标了
num：代表您想要进行统计的列,这里可以输入多个列，只需要指定列号即可：例如：num = c(4:6)
sig_show：代表差异展示方式；sig_show ="abc"是使用字母表示;sig_show ="line"是使用连线和星号表示；如果是NA，那么就不显示显著性结果
result：代表显著性差异分析结果，是一个数据框，每一列是显著性标记字母,MuiKwWlx

# ?MuiPlotresultBox
#使用案例
result = MuiKwWlx(data = data_wt,num = c(4:8))
result
# #直接出图到文件夹中
MuiPlotresultBox(data = data_wt,num = c(4:8),result = result,sig_show ="abc")

线柱图

输入和箱线图一致

# ?MuiPlotresultBox
#使用案例
result = MuiKwWlx(data = data_wt,num = c(4:8))
result
# #直接出图到文件夹中
MuiPlotReBoxBar(data = data_wt,num = c(4:8),result = result,sig_show ="line")

差异结果展示：分面展示柱状图：(FacetMuiPlotresultBar)

data：输入数据框，第一列为样本编号，第二列为分组，注意分组标签必须设定为group，第三列以后就是妮妮测定或者收集的指标了
num：代表您想要进行统计的列,这里可以输入多个列，只需要指定列号即可：例如：num = c(4:6)
sig_show：代表差异展示方式；sig_show ="abc"是使用字母表示;sig_show ="line"是使用连线和星号表示；如果是NA，那么就不显示显著性结果
result：代表显著性差异分析结果，是一个数据框，每一列是显著性标记字母,MuiKwWlx
ncol:代表分面展示每一行放几张图

# ?FacetMuiPlotresultBar
# # #使用案例
result = MuiaovMcomper(data = data_wt,num = c(4:11),method_Mc = "Tukey")
result
result1 = FacetMuiPlotresultBar(data = data_wt,num = c(4:11),result = result,sig_show ="abc",ncol = 4 )
result1[[1]]

差异结果展示：分面展示箱线图：(FacetMuiPlotresultBox)

data：输入数据框，第一列为样本编号，第二列为分组，注意分组标签必须设定为group，第三列以后就是妮妮测定或者收集的指标了
num：代表您想要进行统计的列,这里可以输入多个列，只需要指定列号即可：例如：num = c(4:6)
sig_show：代表差异展示方式；sig_show ="abc"是使用字母表示;sig_show ="line"是使用连线和星号表示；如果是NA，那么就不显示显著性结果
result：代表显著性差异分析结果，是一个数据框，每一列是显著性标记字母,MuiKwWlx
ncol:代表分面展示每一行放几张图

# ?FacetMuiPlotresultBox
# #使用案例
result = MuiKwWlx(data = data_wt,num = c(4:11))
result
#
result1 = FacetMuiPlotresultBox(data = data_wt,num = c(4:11),result = result,sig_show ="abc",ncol = 4 )
result1[[1]]

使用两种方法，我们可以对比非参数检验和方差检验结果是否一致

下面使用线柱图展示

# ?FacetMuiPlotresultBox
# #使用案例
result = MuiKwWlx(data = data_wt,num = c(4:11))
result
#
result1 = FacetMuiPlotReBoxBar(data = data_wt,num = c(4:11),result = result,sig_show ="abc",ncol = 4 )
result1[[1]] + theme_bw()

注意以上三种分面展示的目前仅支持字母标注显著性，连线形式的尚未添加。

单个指标一体化分析（SingleStat）

这个函数可以将我们的目标列做正态检验和方差齐性，然后根据结果选择方差检验或者多重比较方法，最后选择自己需要的出图方式和显著性标记方式展示。

data：输入数据框，第一列为样本编号，第二列为分组，注意分组标签必须设定为group，第三列以后就是妮妮测定或者收集的指标了
i：代表您想要进行统计的列，比如：第三列：i = 3
method_Mc：选择需要使用的多重比较方法，这里又多种方法可供选择：method_Mc == “LSD”;method_Mc == “SNK”;method_Mc == “Duncan”;method_Mc == “scheffe”
plot：可以选择需要的出图类型，柱状图和箱线图

# ?SingleStat
# # #使用案例
# #输出结果第一个为图片，第二个是统计结果，第三个是统计方法
result = SingleStat(data = data_wt,plot = "bar",method_Mc = "Tukey",i= 4,sig_show ="abc")
# #导出图片
p = result[[1]]
p

可以更换出图方式,当然这里会自动判断使用方差分析，还是非参数检验。选择结果会展示在结果的第三个列表中，可自行查看。

# ?SingleStat
# # #使用案例
# #输出结果第一个为图片，第二个是统计结果，第三个是统计方法
result = SingleStat(data = data_wt,plot = "box",method_Mc = "Tukey",i= 4,sig_show ="abc")
# 提取差异检测结果
result[[2]]
# 提取差异检测放啊
result[[3]]# #导出图片
p = result[[1]]
p

# ?SingleStat
# # #使用案例
# #输出结果第一个为图片，第二个是统计结果，第三个是统计方法
result = SingleStat(data = data_wt,plot = "boxbar",method_Mc = "Tukey",i= 4,sig_show ="abc")
# 提取差异检测结果
result[[2]]
# 提取差异检测放啊
result[[3]]# #导出图片
p = result[[1]]
p

多个指标一体化分析(MuiStat)

实现了多个指标批量整体运行；这个函数可以将我们的目标列做正态检验和方差齐性，然后根据结果选择方差检验或者多重比较方法，最后选择自己需要的出图方式和显著性标记方式展示。

# ?MuiStat
#使用案例
result = MuiStat(data = data_wt,num = c(4:11),method_cv = "leveneTest",method_Mc = "Tukey",sig_show  = "abc",ncol = 4,plot = "box",plottype = "mui")
result[[1]]# 提取方差检测的列
result$aov
# 提取f非参数检测的列
result$wlx
# 提取差异检测结果
result$table

柱状图


result = MuiStat(data = data_wt,num = c(4:11),method_cv = "leveneTest",method_Mc = "Tukey",sig_show  = "abc",ncol = 4,plot = "bar",plottype = "mui")
result[[1]]

线柱图


result = MuiStat(data = data_wt,num = c(4:11),method_cv = "leveneTest",method_Mc = "Tukey",sig_show  = "abc",ncol = 4,plot = "boxbar",plottype = "mui")
result[[1]]

data：输入数据框，第一列为样本编号，第二列为分组，注意分组标签必须设定为group，第三列以后就是妮妮测定或者收集的指标了

num：代表您想要进行统计的列,这里可以输入多个列，只需要指定列号即可：例如：num = c(4:6)

method_cv：代表选择方差齐性的方法，有两种可供选择：method_cv == “bartlett.test” ;method_cv == “leveneTest”

method_Mc：选择需要使用的多重比较方法，这里又多种方法可供选择：method_Mc == “LSD”;method_Mc == “SNK”;method_Mc == “Duncan”;method_Mc == “scheffe”

plot：可以选择需要的出图类型，柱状图和箱线图

sig_show：代表差异展示方式；sig_show ="abc"是使用字母表示;sig_show ="line"是使用连线和星号表示；如果是NA，那么就不显示显著性结果

ncol：代表分面展示每一行放几张图

plottype：输出图形是分面展示plottype =mui，还是单张展示:plottype == “single”

后记

感谢大家对EasyAovWlxPlot包的支持，在这篇推送发出去之前，我就已经将新包替换好了，也正是因为大家的帮助，让这个包逐渐走向成熟，后面我们会继续在丰富多因素差异分析，回归等内容，都是方便可以而设计的，所以希望大家继续支持。如有问题请大家继续在宏基因组留言。如果问题迫切，可以添加我的个个人微信：nanjingxuezi。

写在后面

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学习扩增子、宏基因组科研思路和分析实战，关注“宏基因组”

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