植物病原菌致病性测定

将获得的病原菌进行寄主回接，完成柯赫氏法则的验证。观察实验室寄主发病症状与田间发病症状是否保持一致，验证发病的寄主中分离的病原菌与接种病原菌是否一致，并记算病原菌的致病力。具体操作如下：

催芽：选取饱满的种子，用 55°C 无菌水浸泡种子 2 h 后，把种子放在底部铺有湿润纱布的保湿盒中，置于 28°C 的恒温箱中进行催芽，备用。

菌种培养：将保存的菌种在 PDA 平板上活化后，转接至 PD 液体培养基中，放在摇床上28°C 振荡培养 7 d，用于菌悬液的制备。

菌悬液的制备：将在 PD 液体培养基中培养好的菌株用双层纱布过滤除去菌丝， 5000 rpm离心 10 min 后，弃上清液，取沉淀物加入适量的蒸馏水，再用血球计数板将菌悬液调配成浓度为 1 ×106 mL-1 的孢子悬浮液备用。

接种方法有以下 3 种：

伤根灌根法：待蔬菜苗长至 2~3 片真叶时，利用灭菌牙签对植株侧根进行损伤，在伤口周围 1 cm 处扎一约 3~4 cm 的小穴，沿小穴灌入 10 mL 的菌悬液，以灌入 10 mL 的无菌水的植株为清水对照。

蘸根接种法：蔬菜幼苗在一叶一心时，拔出幼苗，洗去泥土，将根部稍加损伤，在接种液中浸泡 15 min 并不断摇晃，最后定植在消毒土中。对照处理用无菌水浸泡根部 15 min 并不断摇晃，最后定植。

胚根浸种法：种子出芽长 2~3 mm 左右时进行接种，将胚根长度一致的种子置于小烧杯内，注入菌悬液，浸泡 30 min 后倒去菌悬液，立即播种于装有灭菌土的塑料钵内，覆土。对照处理用无菌水浸泡 30 min 后，立即播种，覆土。

试验一般设置 3 次重复，每个重复设 10 个处理。接种后，每天观察植株的长势和发病情况，及时记录并采集症状图像。待植株发病后，完成柯赫氏法则的验证，确认分离得到的镰孢菌为导致蔬菜根部病害的致病菌。根据调查结果分析病害的发病程度并计算病情指数，病害评估标

准和病情指数公式 2-1 如下：

0 级：无病症

1 级：真叶或子叶上出现轻微萎蔫，但生长正常

2 级：真叶或子叶上出现明显的坏死斑，根部出现病变，生长受到一定影响

3 级：根部坏死引起局部性萎蔫，或生长僵化

4 级：整体萎蔫，倒伏枯死，根部严重病变

病情指数=[∑(各级病株数×相对级数值)/(总株数×最高级数代表值)]×100

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