荧光底物和化学发光底物的介绍（腔肠素/腔肠素-H/BZiPAR/Z-FR-R110）

荧光底物

与色原底物相比,荧光底物检测灵敏度高,而且可以同时采用几种不同颜色的荧光材料;但是荧光底物存在以下缺点:激发和检测荧光需要价格昂贵的光源、过滤器和扫描仪，检测成本高;荧光在观测期间或样品存放期间、甚至暴露于室内光线时都会衰减,导致难以获得恒定值或定量数据;另外从细胞和其他分子里产生的自发荧光(在许多活体中天然存在的某些特定化合物产生的荧光)也会对实验结果产生干扰。

常规的荧光材料难以直接用作HRP底物,但是它们与酪胺[4一(2-氨乙基)–苯酚]耦联后却可以在HRP作用下发生沉积。这种基于酪胺的荧光色素沉积技术的正式名称叫催化报道分子沉积( catalyzed reporter deposition , CARD) ,或者酪胺信号放大( tyramine signal amplification , TSA)。该技术是由Bobrow 等3于1989年首次提出的,其应用范围开始仅限于免疫印迹和ELISA分析,后来则延伸到免疫组化、原位杂交等诸多领域,在基于酶的灵敏检测中得到广泛的应用。

与CARD中荧光分子只有通过与酪胺形成复合物才能被HRP催化沉积不同, Krieg 等”合成了一类2-(2-苯乙烯基)-苯并噻唑衍生物,这类化合物可以作为新型荧光底物直接用于HRP的活性定位,其基本结构式见图1。经过优化筛选,其中(E)-2-2-[4-羟苯基]乙烯基-3-乙基-1 ,3-苯并噻唑碘化物的效果最好,与Alexa荧光素546-酪胺偶合物相比,这种新型的底物荧光染色特异性强、灵敏度高.背景低。总之,通过将苯乙烯基苯并噻唑衍生物进行酶交联从而在 HRP活性位点附近产生多重荧光色素,是一种可以替代荧光染料标记酪胺沉积技术的很有前景的方法。

图1 2-(2-苯乙烯基)-苯并噻唑

化学发光底物

化学发光是指伴随化学反应过程所产生的光的发射现象。化学发光与荧光的区别是形成激发态分子的激发能不同,荧光是吸收了光能使分子激发而发射的光,化学发光则是吸收了化学反应过程中所产生的化学能使分子激发而发射的光。化学发光底物━般具有高化学键能,在酶的作用下化学键断裂,能量释放出来形成可见光。图2展示了一种化学发光底物一鲁米诺的发光机制。信号采用光电倍增管,雪崩二极管或其他灵敏的光学检测器检测,或者采用照相胶片显影。化学发光检测灵敏度高、背景低,因而得到广泛应用。但是这种方法也存在很多缺点;检测仪器价格昂贵,采用胶片显影又不方便;发射光必须随时采集,导致难以得到恒定值数据;要实现高灵敏度检测,需要长达数小时甚至1 d的光积分时间等。

图2

有关产品提供

Firefly Luciferase Assay Kit

Firefly & Renilla Dual Luciferase Assay Kit

Coelenterazine f

Coelenterazine cp

Coelenterazine 400a (DeepBlueC)

腔肠素

腔肠素-H

Methyl Coelenterazine

Z-FR-R110

Z-FR-AMC

Z-AAD-R110

Z-AA-R110-PEG

Rhodamine 110 (high purity)

R110-PEG (Rhodamine 110-PEG)

NucView 488 Caspase-3 Enzyme Substrate, 1 mM in PBS

NucView 488 Caspase-3 Enzyme Substrate, 1 mM in DMSO

NucView 488 Caspase-3 Assay Kit for Live Cells

NucView 405 Caspase-3 Substrate, 1 mM in DMSO

D2R

BZiPAR

BZAR

Ac-IETD-R110

Ac-DEVD-AMC

2',7'-二氯荧光素二乙酸酯

Dihydrorhodamine 123, dihydrochloride salt

二氢若丹明123

二氢乙锭

CF640R Tyramide

CF594 Tyramide

CF568 Tyramide

CF543 Tyramide

CF488A Tyramide

zl 02.04

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