PEPC丨磷酸烯醇丙酮酸羧化酶应用实例展示

PEPC（磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶），EC=4.1.1.31，属于羧基裂解酶家族，催化向磷酸烯醇式丙酮酸（PEP）中添加二氧化碳以形成草酰乙酸。备选名称：PEPCase 1、PEPCase 3、PEPC 1、PEPC 3

PEPC丨磷酸烯醇丙酮酸羧化酶：

KLH结合合成肽高度保守PEPC1和来自不同植物物种的序列，包括拟南芥Q9MAH0、At1g53310（PEPC 1）、Q84VW9、At3g14940（PEPC 3）。选择用于诱导该抗体的肽在该酶NP_177043.2（PEPC 4）的细菌类型中也完全保守。

艾美捷PEPC丨磷酸烯醇丙酮酸羧化酶应用实例：

在4-12%NuPage（Invitrogen）LDS-PAGE上分离（1）用蛋白质提取缓冲液提取的拟南芥叶、用PEB提取的菠菜总细胞、用PEB提取的大麦总细胞、用PEB提取的玉米总细胞中的5µg总蛋白，并在PVDF上杂交1h。在室温下搅拌，在20 mM Tris、137 mM氯化钠pH 7.6和0.1%（v/v）吐温-20（TBS-T）中加入2%封闭试剂（GE Healthcare）1小时后，立即封闭印迹。在室温下搅拌，以1:10000的稀释度在一级抗体中培养印迹1h。倾析抗体溶液，将印迹短暂冲洗两次，然后在室温下搅拌，在TBS-T中洗涤一次15分钟，洗涤3次5分钟。在室温下，在2%封闭溶液中稀释至1:50 000的二级抗体（抗兔IgG-辣根过氧化物酶结合物）中搅拌1小时，培育印迹。按照上述方法清洗印迹，并根据制造商说明使用化学发光检测试剂显影5分钟。使用CCD成像仪（FluorSMax，Bio-Rad）和Quantity One软件（Bio-Rad）获得斑点图像。

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