人脐静脉内皮细胞（HUVEC细胞）培养常见问题及解决方案

很多站友会养人脐静脉内皮细胞（HUVEC），作为初来乍到的科研新手，都有这样一种惆怅的感受：“细胞代代无穷已，江月年年只相似”（改编自唐代诗人张若虚的《春江花月夜》），所以如何处理那些似曾相似的问题，我觉的认真学习前辈们的经验是提高养细胞水平的一条捷径，丁香园细胞技术讨论版就为大家提供了这条捷径。用“人脐静脉内皮细胞”、“HUVEC”搜索版内有关话题会获得很多珍贵的知识，但是进行整理的帖子都距现在10年左右了，仔细看过内容会发现，有些已随着实验试剂的进步变的很简单了，比如由粉剂如何配置培养液，现在只需要在试剂商那里直接买来就可以了，所以很有必要总结一个最新版的人脐静脉内皮细胞（HUVEC）常见问题贴，以方便查阅。
自己用“人脐静脉内皮细胞”、“HUVEC”附加一些条件对版内进行检索，重点对近一年的内容进行综合，对以前有价值的帖子同样列出。
那些书上有的内容只需要去翻书就行了，原代培养没做过（一般都是直接买），所以这里重点列出培养过程中遇到的问题，及简要总结，希望为站友提供解决问题的思路。
1、细胞培养条件的问题
★有培养HUVEC的请进来
http://www.dxy.cn/bbs/topic/29010536?keywords=HUVEC
很有价值的帖子！不光讨论了如何选择培养条件，还有ningningz站友提供了很多外文参考文献，从其中可以找到比较可靠的培养方法，此外，还对消化时胰酶浓度进行了讨论，认为0.25%的胰酶浓度太大了，ningningz站友认为胰酶浓度超过0.04%就对细胞有损伤了。
关于胰酶浓度，自己也有些看法，开始用0.05%的胰酶加0.02%EDTA消化，感觉消化时间太长，消化的也不彻底，怀疑是胰酶时间比较长了（但没有过期）。于是换用新领的0.25%的胰酶加0.02%的EDTA，速度是快了，可以消化有些过度，第二天看细胞的时候，培养瓶中有中等量的细胞漂浮。请教了下学长，他说他不会等细胞大部分都掉下来才终止，而是消化差不多了就终止，让后把细胞“拍”下来，至今我也没明白拍是什么意思，希望有站友能帮我解答，你对人脐静脉内皮细胞（HUVEC）消化有什么独到见解？
★【求助】脐静脉内皮细胞传代培养12天后全部脱壁，什么原因？？？
http://www.dxy.cn/bbs/topic/27152849?keywords=HUVEC
楼主的问题真是说出了我的心声！里边有关于传代的注意事项、胰酶浓度、双抗加不加的讨论，很值得一看。
★【求助】我的HUVEC为什么都死掉了？
http://www.dxy.cn/bbs/topic/13677964?keywords=HUVEC
由细胞的死亡回溯死因，多有这样的思考，相信你很快就能把细胞养好的！里边有关于消化时间、培养条件的选择的讨论，值得一看。
【求助】如何养脐静脉内皮细胞
http://www.dxy.cn/bbs/thread/28759407#28759407
小结：站友主要的建议就是生长因子加没加，培养基用没用明胶铺过
【求助】HUVEC培养
http://www.dxy.cn/bbs/topic/28472839?keywords=HUVEC
同样是问HUVEC的培养条件，站友建议DMEM+10%FBS就可以。
3、培养基的选择
类似的帖子在版内可以搜到很多，一下仅列举4个例子（2个旧的，2个最近一年的）。
【求助】人脐静脉内皮细胞株培养心得
http://www.dxy.cn/bbs/topic/28467490?keywords=%E4%BA%BA%E8%84%90%E9%9D%99%E8%84%89%E5%86%85%E7%9A%AE%E7%BB%86%E8%83%9E
这个帖子写的是“心得”，实际是想求心得体会。
小结：englishempire 站友提供了他养人脐静脉内皮细胞的培养液成分，供参考：ECM+10%FBS+1%PS(ECM是sciencell进口的其中已经有促生长因子）
【求助】人脐静脉内皮细胞传代培养
又一个关于培养液选择的问题
http://www.dxy.cn/bbs/topic/26796026?keywords=%E4%BA%BA%E8%84%90%E9%9D%99%E8%84%89%E5%86%85%E7%9A%AE%E7%BB%86%E8%83%9E
小结：有的人用1640，有的用DMEM，也有的用高糖DEME，有的人额外加上生长因子（但是有生长因子有很多种，比如ECGS、ECGF）。虽有这些不同，但是对于10%的胎牛血清和1%的双抗，大家的建议是一致的。
【求助】人脐静脉内皮细胞传代培养基的选用
http://www.dxy.cn/bbs/topic/5958262?keywords=%E4%BA%BA%E8%84%90%E9%9D%99%E8%84%89%E5%86%85%E7%9A%AE%E7%BB%86%E8%83%9E
类似的讨论，有用1640、DMEM、高糖DMEM、EBM、EGM、M200、M199，同样没有一个统一的答案。
★【求助】人脐静脉内皮细胞用什么培养基啊？？
这是06年关于培养基选择的帖子，看来这个问题是由来已久了。
http://www.dxy.cn/bbs/topic/7823005?keywords=%E4%BA%BA%E8%84%90%E9%9D%99%E8%84%89%E5%86%85%E7%9A%AE%E7%BB%86%E8%83%9E
总结：看过以上两个有代表性的帖子，关于培养液的选择问题可谓仁者见仁。个人认为，除了参照买细胞时的说明书，借鉴养过这类细胞的学长学姐的经验外，最重要的还是自己去摸索合适的培养条件，俗话说“实践出真知”，所以早些动手吧，经验都是在失败中积累起来的。
3、细胞内各种“点”的问题
★【求助】急！求HUVEC细胞培养高手指导！！！
http://www.dxy.cn/bbs/topic/16110734?keywords=HUVEC
同样是小黑点与细胞死亡的故事，zhouzhou90305108站友的分析很有道理，HUVEC的传代次数是有限了，自己养总期望着它能一直活下去。
【求助】请教各位，人脐静脉内皮细胞中这么多的颗粒是什么？
http://www.dxy.cn/bbs/topic/14372046?keywords=%E4%BA%BA%E8%84%90%E9%9D%99%E8%84%89%E5%86%85%E7%9A%AE%E7%BB%86%E8%83%9E
细胞内的点，还挺多的，这到底是什么呢？
★【求助】购买的HUVEC疯长
有图的讨论，还是细胞内有点的问题
http://www.dxy.cn/bbs/topic/10869145?keywords=HUVEC
有的站友提供了CMJ（Chinese journal of medicine）上的图片，那应该是梦寐以求的状态吧！
csjcau站友提供了一种方法，不要用剩下的血清，用新的试试！不过楼主试过之后还是这个样子，看来要另寻原因
【求助】HUVEC细胞内部出现黑色小颗粒
http://www.dxy.cn/bbs/topic/14341874?keywords=HUVEC
有图的案例，这种状况还真是不少，站友给出了两种可能，一是支原体感染，另一个是细胞老化。
【求助】huvec（人脐静脉内皮细胞）为什么出现小黑点？？
http://www.dxy.cn/bbs/topic/27167446?keywords=%E4%BA%BA%E8%84%90%E9%9D%99%E8%84%89%E5%86%85%E7%9A%AE%E7%BB%86%E8%83%9E
帖子有图有真相，只是问题还没解决，可能您也遇到过，持续关注。
总结：看来出现小黑点是非常常见的，自己养的时间还比较短，暂时没遇到这种情况。对于为什么会这样，站友在上面的帖子中根据自己的经验提出了许多观点，都有其道理，但是确切的原因是什么仍有待进一步探索。
4、形态
★【求助】HUVEC形态
同样求助镜下小黑点的问题，有图，无解答。
http://www.dxy.cn/bbs/topic/28795506?keywords=%E4%BA%BA%E8%84%90%E9%9D%99%E8%84%89%E5%86%85%E7%9A%AE%E7%BB%86%E8%83%9E
其中那幅100倍的照片初看起来长得很慢，但是你点放大了看，很多细胞就像神经元细胞一样长出来长长的触角，这是为什么呢？
自己倒没有遇到这种情况，但是遇到细胞形态不好的时候，就是经常会呈现出多角型，三角的、五角的都有，我估计是细胞状态不好的表现。
【求助】HUVEC细胞形态
http://www.dxy.cn/bbs/topic/28878404?keywords=HUVEC
有图有讨论，san000战友也将其培养的HUVEC细胞照片传上来，有参考价值，人脐静脉内皮细胞（HUVEC）的形态到底如何呢？怎样的细胞形态预示着怎样的问题呢？
5、细胞污染
【求助】HUVEC细胞污染
http://www.dxy.cn/bbs/topic/27149716?keywords=HUVEC
有图有真相的例子，值得看一看。
【求助】细胞污染
http://www.dxy.cn/bbs/topic/27206925?keywords=HUVEC
楼主传了3张图，很清晰，今年1月1号发的帖子，至今无人回复，但自己觉得这是比较明显的细胞污染。可以借鉴。
6、其它相关问题
【求助】HUVEC血清饥饿
http://www.dxy.cn/bbs/topic/24898685?keywords=HUVEC
有关血清饥饿的讨论，clifford的发言质量很高，如果你需要的话可以参看。
【求助】新买的HUVEC，复苏24h后，不贴壁
http://www.dxy.cn/bbs/topic/13044285?keywords=HUVEC
关于细胞复苏的帖子，可以从讨论中吸取几点经验。
【求助】HUVEC细胞“杯具”重演
http://www.dxy.cn/bbs/topic/16790325?keywords=HUVEC
关于细胞复苏的又一讨论贴。
脐静脉内皮细胞（HUVEC）能不能在体外模拟某些肿瘤的血管内皮？
http://www.dxy.cn/bbs/topic/28591265?keywords=%E8%84%90%E9%9D%99%E8%84%89%E5%86%85%E7%9A%AE%E7%BB%86%E8%83%9E
站友的建议是可以的，可以用共培养来做。同样的问题还有问可不可以替代婴幼儿血管瘤干细胞的。
养的好好的，为什么接种到96孔板就不长了？
http://www.dxy.cn/bbs/topic/28849201?keywords=%E4%BA%BA%E8%84%90%E9%9D%99%E8%84%89%E5%86%85%E7%9A%AE%E7%BB%86%E8%83%9E
真心为ningningz站友的耐心解答点赞，大家遇到相似的问题可以向其请教。
7、老帖经典贴
★【互助小组】正在养或已经养过HUVEC的请进。
【互助小组】正在养或已经养过HUVEC的请进。
发表在10年前的帖子，回帖到目前有181，楼主对那时的帖子进行了总结，跟帖中也有很多有价值的讨论，推荐看。
【整理】本站关于脐静脉内皮细胞的链接
http://www.dxy.cn/bbs/topic/1547367?keywords=HUVEC
看过许多帖子后，自己真有种“江月年年只相似”的感觉，下回自己养细胞再失败了就回来看看这个帖子，然后告诉自己，无数次的失败是成功的必经之路。

实验材料推荐：

lonza人脐静脉内皮细胞（HUVEC）及培养基

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