实验新手必须知道的细胞计数技巧

科研人生美得很，回想当初第一次独立进行细胞实验的时候，发现自己还是不会细胞计数，哪怕已经跟着师兄师姐一起操作了N多回。害！这还不是科室经费不足惹得祸么！

经费要是足够多，可就能用上自动细胞计数仪了，但最准的还是原始版本的纯手动细胞计数（即用细胞计数板在显微镜下计数）。之前我偶然发现某大牌细胞计数仪使用一段时间后（大约三个月），它的系统就出现错乱，显示得出的细胞数量级还有参考性，但反应细胞死活的比例时，用细胞计数板加上台盼蓝手动计数的结果和用细胞计数仪标配的细胞计数板加上台盼蓝的计数结果相比较，得到了完全相反的数据，手动计数发现细胞成活率在95%以上，可仪器显示细胞死亡率在95%以上。所以，今儿个咱们还是需要好好了解一下纯手动细胞计数的详细步骤！

假如我们有个实验目的是准备给小鼠种皮下瘤，但这个实验对肿瘤细胞数量有着最低的要求，那么我们到底该咋办呢？

从培养箱中取出需要备用的肿瘤细胞，在显微镜下观察细胞是否为单层细胞，最好是处于对数生长期的细胞，然后用胰酶消化它，预期制备总的细胞浓度为6 x 106cell/3mL的肿瘤细胞悬液（用PBS制备细胞悬液）。

假设共有27只小鼠需要种肿瘤，每只小鼠2x 105个细胞，并注射100uL，因此可以准备30只小鼠的细胞量，即3000uL（3mL）体积的PBS里含有6x 106个细胞。于是我们期望细胞的数量能超过6x 106个细胞。

为了达成目的，我们将细胞处理的详细过程分为A和B两个部分：

A细胞计数的方法

[1] 准备计数板：用无水乙醇或 95%乙醇清洁计数板和盖玻片，待干燥后，把盖玻片覆在计数板上面，使之微微移向一侧，露出计数板台面少许；

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