CCK-8,让细胞活性检测 So Easy! - MedChemExpress
PART 1 CCK-8 简介
■ CCK-8 比色检测试剂盒
Cell Counting Kit-8,是一种基于 WST-8 而广泛应用于细胞增殖和细胞毒性的快速、高灵敏度、无放射性的比色检测试剂盒。
CCK-8 溶液可以直接加入到细胞样品中,不需要预配各种成分。WST-8 在电子耦合试剂存在的情况下,可以被线粒体内的一些脱氢酶的电子传递还原生成橙黄色的甲瓒 (Formazan)。而线粒体脱氢酶只在活细胞中存在,因此细胞增殖越多越快,则颜色越深;化合物的细胞毒性越大,细胞死亡量越多,则颜色越浅。对于同样的细胞,颜色的深浅 (生成的甲瓒量) 和细胞数目呈线性关系。可通过酶标仪检测 430-490 nm 处的吸光度 (OD 值),OD 值与细胞活力成正比,从而进行定量分析。
图 1. CCK-8 检测原理
图 2. 不同的细胞活力检测方法的优缺点
MCE CCK-8 产品一经推出,就受到了大家的信赖和一致好评,其助力发表的文章数量也在逐年增加。小 M 对发表文章的影响因子进行分析发现,CCK-8 助力发文期刊的影响因子分布较广,IF≥10 的共有 170+ 篇,5≤IF≤10 的共有 560+ 篇。
图 3. 左:MCE CCK-8 助力发表文章数年增长情况
右:不同影响因子文章数分布情况
(截止至 2022 年 9 月)
■ 高分文献验证
其中最高分文章为中国科学院上海营养与健康研究所肖意传教授团队的 Cytoplasmic DNA sensing by KU complex in aged CD4+ T cell potentiates T cell activation and aging-related autoimmune inflammation,发表在 Immunity (IF 43.474)。
其他高分期刊还包括
Mol Cancer (IF 41.444);
Signal Transduct Target Ther (IF 38.104) ;
Adv Mater (IF 32.086) 等。
更多文章可下滑点击
Cell Mol Immunol. 2022 Sep;19(9):1030-1041.
J Med Virol. 2022 Aug;94(8):3847-3856.
ACS Nano. 2022 Aug 3. 10.1021/acsnano.2c06300.
Nat Commun. 2022 May 10;13(1):2563.
Immunity. 2021 Apr 13;54(4):632-647.e9.
Adv Mater. 2021 Nov;33(45):e2104594.
Nat Cell Biol. 2020 Dec;22(12):1447-1459.
Signal Transduct Target Ther. 2020 Nov 6;5(1):216.
Mol Cancer. 2019 Nov 14;18(1):161.
Cell Discov. 2019 Aug 6;5:39.
PART 2 CCK-8 的应用与案例
■ 客户验证 1---细胞毒性实验
为了验证筛选的 iZAK2 对衰老相关自身免疫的治疗作用,在小鼠原代 CD4+ T 细胞中检测了 iZAK2 的生物学功能,结果发现 iZAK2 处理不影响细胞活力或细胞质 DNA 积累。此外,iZAK2 可减轻老龄小鼠实验性自身免疫性脑脊髓炎 (EAE) 相关自身免疫症状,以上结果都表明 iZAK2 是一种潜在的治疗衰老相关自身免疫性疾病的化合物。
图 4. iZAK2 对小鼠原代 CD4+ T 细胞活力的影响[1]
■ 客户验证 2---细胞活力检测
为了验证 poly (I:C) 预处理在体外抑制炎症反应和凋亡细胞死亡,用 CCK-8 法检测 H9C2 细胞中不同复氧时间和不同 poly (I:C) 浓度下的细胞活力,结果表明 poly (I:C) 预处理显著抑制了糖氧剥夺 (OGD) 诱导的炎症和凋亡反应来限制细胞死亡。
图 5. CCK-8 法测定不同复氧时间和
不同 poly (I:C) 浓度下的细胞活力[2]
■ 客户验证 3---细胞增殖测定
吞噬死亡细胞对于维持组织内稳态和预防炎症是必不可少的,经典理论认为这一过程主要是由巨噬细胞和树突状细胞等专职性吞噬细胞完成的。然而,越来越多的数据表明邻近的非专职性细胞在这一过程中也发挥了作用。虽然吞噬的死细胞可以为活细胞提供营养,但实验结果表明吞噬和没有吞噬死细胞的细胞在增殖方面并没有很显著的差异。
图 6. CCK-8 法测定 NIH 3T3 细胞
吞噬死细胞前后的细胞活力[3]
PART 3 CCK-8 使用注意小贴士
小白: CCK-8 与细胞孵育后一般多久可以检测呢?
小M: CCK-8 的培养时间一般为 1-4 h,但在培养 30 min 左右即可肉眼观察显色程度,最佳反应时间以具体显色的最佳时间为准。
小白: CCK-8 检测依赖于脱氢酶催化的反应,所以还原剂会干扰检测,那我该如何确定我的待测溶液是否有还原性呢?
小M: 将不含细胞的待测溶液孔中加入 10 μL CCK-8 溶液,孵育 1-4 h 后,测定在 450 nm 处的空白吸光度。若测得的吸光度很小,则说明含有较少的还原剂,正式实验可以直接加入 CCK-8 进行检测;若测得的吸光度相对较大,则说明存在较多还原剂,正式实验时需去除培养基,将细胞洗涤两次后,再加入新的培养基和 10 μL CCK-8 溶液。
小白: 那培养基中含有酚红会对最终的实验结果有影响吗?
小M: 培养基中的酚红不会影响实验结果,酚红的吸光度可以在计算时,通过扣除空白孔中本底的吸光度而消去。
小白: CCK-8 和活细胞内的脱氢酶持续反应使溶液颜色不断加深,我该如何终止 CCK-8 反应呢?
小M: 以下方法任选其一均可终止 CCK-8 反应:a). 在显色反应后,将培养板放置 4℃ 冰箱内;b). 每孔加 10 μL 0.1 M HCl 溶液;c). 每孔加 10 μL 1% (w) 的 SDS 溶液。
小M: 此外,需要注意!若培养时间较长,一定要注意蒸发问题。可以在 96 孔板的四周每孔中加入培养基或无菌 PBS,同时将培养板置于靠近培养箱内水源的地方,缓减蒸发。
小白:Get Get 新技能GET
参考文献
1. Wang Y, et al. Cytoplasmic DNA sensing by KU complex in aged CD4+ T cell potentiates T cell activation and aging-related autoimmune inflammation. Immunity. 2021 Apr 13;54(4):632-647.e9.
2. Chen E, et al. Poly(I:C) preconditioning protects the heart against myocardial ischemia/reperfusion injury through TLR3/PI3K/Akt-dependent pathway. Signal Transduct Target Ther. 2020 Nov 6;5(1):216.
3. Lu J, et al. Efficient engulfment of necroptotic and pyroptotic cells by nonprofessional and professional phagocytes. Cell Discov. 2019 Aug 6;5:39.
CCK-8,让细胞活性检测 So Easy! - MedChemExpress相关推荐
- 活死细胞染色——Cell Meter 细胞活性检测试剂盒
关于活死细胞染色的研究,Calcein AM和碘化丙啶(PI)这两种活死细胞染色试剂盒:Calcein AM是一种疏水化合物,容易渗透完整的活细胞,进入细胞后被酯酶水解产生强烈荧光,同时它能完整的保存 ...
- GEF活性检测试剂盒的主要用途和应用
今天我们就主要来聊一聊小G蛋白活性增强剂--鸟苷酸交换因子(GEF),GEF 是通过催化其目标 GTPase上的核苷酸交换来发挥作用,GEF与核苷酸结合的 GTPase 结合,这会导致结合的核苷酸被释 ...
- 众多文章引用的,氧自由基抗氧化能力(ORAC)活性检测试剂盒
自由基与多种人类疾病的发生发展都有着密切的关系.在清除自由基的过程中,抗氧化剂发挥着重要的作用.因此,了解抗氧化剂的作用及能力就变得至关重要. 在评价抗氧化剂能力的诸多方法中,抗氧化能力ORAC(又称 ...
- Cell Biolabs丨艾美捷——ORAC活性检测
今天和大家一起聊一聊Cell Biolabs/艾美捷关于ORAC活性检测的方案: Cell Biolabs:细胞学试剂品牌,为生物技术和研究类客户提供基于细胞功能研究以及疾病等方面的技术和服务.主要涵 ...
- 使用方法注意事项丨超氧化物歧化酶(SOD)活性检测试剂盒
CheKine™ 超氧化物歧化酶(SOD)活性检测试剂盒基本信息: 规格:详见说明书 检测方法: ELISA 检测类型:酶免免疫夹心法 灵敏度:高 检测目标:人.大小鼠.猪.犬.羊.兔.牛.马铃薯等动 ...
- Abbkine超氧化物歧化酶(SOD)活性检测试剂盒说明书
背景: 超氧化物歧化酶(SOD,EC1.15.1.1)是催化超氧阴离子歧化成O2和H2O2的酶.它们是抗暴露于O2的所有细胞中超氧化物自由基毒性的重要抗氧化剂.异常的SOD活动与肌萎缩侧索硬化,围产期 ...
- 艾美捷细胞失巢凋亡检测试剂盒测定原理
癌症发展和生长的一个共同特征是转化细胞存活的能力在"独立于锚固"或"球体"的生长条件下.这种对失巢凋亡的抵抗力一直存在显示参与细胞稳态,癌症生长和转移的丧失.抑 ...
- 艾美捷ICT FLICA天冬氨酸蛋白酶(Caspase)活性检测试剂盒说明书
Caspases在细胞凋亡和炎症中发挥重要作用.艾美捷ICT FLICA天冬氨酸蛋白酶(Caspase)活性检测试剂盒被研究人员用于通过培养的细胞和组织中的胱天蛋白酶活性来定量凋亡.用FAM FLIC ...
- qtchart实时动态曲线_极致新体验,实时、无损、长时程细胞分析检测平台
AXION公司最新的MaestroZ细胞分析检测平台,将细胞种在底部植入电极的细胞培养板中,通过检测阻抗值的变化,量化细胞数量或形态上发生的细微变化导致的阻抗值改变,从而达到无标记.非侵入的实时定量细 ...
最新文章
- Python,OpenCV中的非局部均值去噪(Non-Local Means Denoising)
- CMake2:版本号配置与头文件生成
- 三维重建4:Jacobian矩阵和Hessian矩阵
- Cannot check for MySQL Daemon startup because of mysqladmin failure
- pt-online-schema-change 修改主键导致数据删除失败的问题调查
- 创业经验谈(转自:ouravr.com)
- 浮点数取绝对值的方法
- oracle导出表904错误,月光软件站 - 编程文档 - 数据库 - EXP-00008: ORACLE error 904 encountered的解决方法...
- 模数转换器ADC的常用术语和主要技术指标(一)
- 取消管理员取得所有权_win10如何获得管理员所有权?
- 优秀的论文答辩PPT模板值得被应用
- Win11的Credential Manager怎么打开?
- 如何让jar包显示Java图标
- Elasticsearch在docker下安装运行,ES查询、分词器
- Windows程式开发设计指南(十七)文字和字体
- poi对excel进行读取
- 在SpringBoot中启用Http2.0
- 2022年武汉东湖高新区高新技术和专精特新企业跨境融资需求征集申报条件及时间
- WEBGL 2D游戏引擎研发系列 第一章 新的开始
- 程序员小猪队友行为大赏
热门文章
- DropDownList不触发selectedindexchanged事件的原因
- Amazon的Kindle平板电脑
- # es6 学习笔记
- 四、菜单管理(1)---菜单页面、列表呈现,数据管理和删除
- 我的异想天开博客,网商
- 短视频直播源码,显示和隐藏 类似淘宝加载
- 成就别人,就是成就自己
- 今天开始学习计算机操作系统
- linux脚本空间预警,并发送邮件,内含配置邮箱服务器,及报错“Could not resolve host: //smtp.qq.com”、“smtp-server: 502”
- “东数西算”全面启动 2022中国数字经济呈现新格局