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马铃薯凝集素Solanum Tuberosum (Potato) Lectin

马铃薯凝集素由两个相同的50kda亚基组成。这些亚单位在溶液中可以解离,产生一种凝集素的单体形式,这种凝集素不凝集细胞。该凝集素结合N-乙酰葡萄糖胺的低聚物和一些含有N-乙酰葡萄糖胺和N-乙酰壁酸的细菌细胞壁低聚糖。虽然糖结合特异性与小麦胚芽凝集素和曼陀罗凝集素相似,但马铃薯凝集素的一些差异已被报道。

FITC标记凝集素的组织化学染色程序

1.组织切片经脱蜡处理,若是Bouin液固定的组织,用70%乙醇洗3次除去组织切片内的黄色后,再用蒸馏水漂洗;

2.PBS漂洗(含1%牛血清白蛋白)2次,每次5分钟;

3.加入FITC-凝集素(PBS适当*释),置湿盒内孵育,室温1小时;

4.PBS漂洗3次,每次5分钟;

5.水溶性封片剂封片,荧光显微镜观察。

6.结果 FITC标记的凝集素能直接与组织细胞内的糖基结合,从而显示糖基的位置,可用于检测组织细胞中的糖成分,阳性部位呈黄绿色荧光。

注意事项

(1)固定液:以Bouin固定液为佳,也可用70%乙醇固定;

(2)与其他组织化学方法一样,染色过程中,应始终保持一定湿度,使切片保持湿润状态;

(3)需经预实验确定FITC-凝集素的*佳工作浓度;

(4)凝集素的活性部位需重金属离子维持,故可用TBS作为缓冲液,加微量的金属(CaCl2、MgCl2、MnCl2各1.0mmol/L),可增强凝集素的结合能力。

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QY小编:ysl 2022.5.18

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