抗体的N端或C端进行修饰ADC偶联物的过程-瑞禧
C-端修饰则可采用被称为π-clamp peptide sequence(FCPF)技术实现，可在存在竞争性半胱氨酸残基的情况下，用全氟芳烃试剂直接对半胱氨酸进行位点选择性修饰。例如：一种抗体海兔毒素偶联物的制备方法,包括以下步骤:
(1)提供C端具有LPXTG序列的抗MART1蛋白递呈肽EAAGIGILTV/HLAA2复合物的单克隆抗体,具有寡甘氨酸接头的海兔毒素或海兔毒素衍生物;
(2)在Sortase A酶催化下,LPXTG序列与寡甘氨酸接头发生转肽反应,使所述单克隆抗体与具有寡甘氨酸接头的海兔毒素或海兔毒素衍生物进行偶联;
(3)反应完成后,分离纯化得到所述抗体海兔毒素偶联物.通过定点偶联使每分子的抗体带上4分子的MMAE毒素,均一性良好,且在体内实验中展示了良好的肿瘤杀伤能力。
与现有ADCs靶点相比,CLA12vcMMAE ADCs拓展了目前ADCs靶点的选择面,论证了胞内蛋白通过MHCI分子的递呈也可以作为ADCs药物靶点。
对抗体的N端或C端进行修饰已被证明是有效生产同质化ADC的可行策略，可以简单地在蛋白质链末端完成修饰。由于抗体C-端位置距离抗原结合区的距离较远，可以有效保护抗体结合的特异性和亲和力。与之相对，由于N-端距离抗原结合区距离较近，在进行N-末端修饰时需要注意其对抗体的抗原结合能力是否产生影响。在实际应用中，N-末端转氨（N-Terminal transamination）是一种通过将N-端氨基转化为醛官能团，从而实现位点选择性合成ADC的策略。可以利用N-端的半胱氨酸、谷氨酸或丝氨酸等完成N-端修饰。
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