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PBS缓冲液配方.doc
PBS缓冲液配方
不管是免疫组化,还是细胞培养中,常用到PBS缓冲液,下面是我们实验室的配方,供大家参考。
我们实验室的配方:
A液:0.1mol/L磷酸二氢钾:
磷酸二氢钾(KH2PO4,MW136.09)1.361g,加双蒸水至100ml。
B液:0.1mol/L磷酸氢二钠:
酸酸氢二钠(Na2HPO4.2H2O,MW177.99)1.78g,加双蒸水至100ml。
或者酸酸氢二钠(Na2HPO4.12H2O,MW358.14)3.58g,加双蒸水至100ml。
pH -- A液 (ml) -- B液(ml)
5.60 -- 9.50 -- 0.25
5.91 -- 9.00 -- 1.00
6.24 -- 8.00 -- 2.00
6.47 -- 7.00 -- 3.00
6.64 -- 6.00 -- 4.00
6.81 -- 5.00 -- 5.00
6.98 -- 4.00 -- 6.00
7.17 -- 3.00 -- 7.00
7.38 -- 2.00 -- 8.00
7.73 -- 1.00 -- 9.00
8.04 -- 0.50 -- 9.50
一般免疫组化用PBS都只包含Na2HPO4?12H2O(磷酸氢二钠) NaH2PO4?2H2O(磷酸二氢钠)Nacl 用于细胞培养的PBS需含有氯化钾称取8g NaCl、0.2g KCl、1.44g Na2HPO4和0.24g KH2PO4,溶于800ml蒸馏水中,用HCl调节溶液的pH值至7.4,最后加蒸馏水定容至1L即可PBS缓冲液 称取NaCl?8g,KCl?0.2g,Na2HPO4?12H2O?3.63g,?KH2PO4?0.24g,溶于900ml双蒸水中,用盐酸调pH值至7.4,加水定容至1L,常温保存备用。
磷酸盐缓冲液(Phosphate Buffer, PB)
试剂: NaH2PO4·2H2O ? ? Na2HPO4·12H2O
配制方法:配制时,常先配制0.2mol/L的 NaH2PO4和0.2mol/L的Na2HPO4,两者按一定比例混合即成0.2mol/L的磷酸盐缓冲液(PB),根据需要可配制不同浓度的PB和PBS。
(1)0.2mol/L的 Na2HPO4;称取Na2HPO4.12H2O 31.2g(或 NaH2PO4·H2O 27.6g)加重蒸水至1000ml溶解。
(2)0.2mol/L的 Na2HPO4:称取NaHPO4.·12H2O 71.632g(或 Na2HPO4·7H2O 53.6g或 Na2HPO4·2H2O 35.6g)加重蒸水至1000ml溶解。
(3)0.2mol/L pH7.4的PB的配制:取19ml 0.2mol/L的 NaH2PO4和81ml 0.2mol/L的 Na2HPO4·12H2O,充分混合即为0.2mol/L的PB(pH约为7.4~7.5)。若pH偏高或偏低,可通过改变二者的比例来加以调整,室温保存即可。
0.2mol/L磷酸盐缓冲液(pH5.7~8.0)
pH ? 0.2mol/L NaH2PO4(ml) ? 0.2mol/L Na2HPO4(ml)
5.7 ? ? ? ? ? 93.5 ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? 6.5
5.8 ? ? ? ? ? 92.0 ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? 8.0
5.9 ? ? ? ? ? 90.0 ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? 10.0
6.0 ? ? ? ? ? 87.7 ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? 12.3
6.1 ? ? ? ? ? 85.0 ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? 15.0
6.2 ? ? ? ? ? 81.5 ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? 18.5
6.3 ? ? ? ? ? 77.5 ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? 22.5
6.4 ? ? ? ? ? 73.5 ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? 26.5
6.5 ? ? ? ? ? 68.5 ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? 31.5
6.6 ? ? ? ? ? 62.5 ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? 37.5
6.7 ? ? ? ? ? 56.5 ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? 43.5
6.8 ? ? ? ? ? 51.0 ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? 49.0
6.9 ? ? ? ? ? 45.0 ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? 55.0
7.0 ? ? ? ? ? 39.0 ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? 61.0
7.1 ? ? ? ? ? 33.0 ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? 67.0
7.2 ? ? ? ? ? 28.0 ? ?
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